PCR出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增的原因與對(duì)策

時(shí)間：2021/10/8閱讀：3835

PCR出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增：

PCR擴(kuò)增后出現(xiàn)的條帶與預(yù)計(jì)的大小不一致，或大或小，或者同時(shí)出現(xiàn)特異性擴(kuò)增帶與非特異性擴(kuò)增帶。

（1）引物與靶序列不*互補(bǔ)或引物聚合形成二聚體。

（2） Mg2+離子濃度過(guò)高。

（3）退火溫度過(guò)低。

（4） PCR循環(huán)次數(shù) 過(guò)多有關(guān)。

（5）酶的質(zhì)和量，往往一些來(lái)源的酶易出現(xiàn)非特異條帶而另一來(lái)源的酶則不出現(xiàn)，酶量過(guò)多有時(shí)也會(huì)出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增。

其對(duì)策有：必要時(shí)重新設(shè)計(jì)引物。減低酶量或調(diào)換另一來(lái)源的酶。降低引物量，適當(dāng)增加模板量，減少循環(huán)次數(shù)。適當(dāng)提高退火溫度或采用二溫度點(diǎn)法（93℃變性，65℃左右退火與延伸）。

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