細(xì)胞傳代：細(xì)胞在培養(yǎng)過程中不斷增殖，培養(yǎng)皿/瓶空間有限，當(dāng)細(xì)胞接觸過密，生長就會(huì)受到抑制，影響細(xì)胞狀態(tài)，因此我們要把其中一部分細(xì)胞分到別的培養(yǎng)皿/瓶里。

常見問題解答：

Q：為什么我們總說選擇對(duì)數(shù)期細(xì)胞傳代?

A：如下圖：細(xì)胞的生長和分裂，一般遵循以下模式：停滯期，對(duì)數(shù)期(指數(shù)期)，平穩(wěn)期(平臺(tái)期)和衰退期。為了確?；盍Γz傳穩(wěn)定性和表型穩(wěn)定，必須使細(xì)胞保持在對(duì)數(shù)期。

Q：那如何確定細(xì)胞對(duì)數(shù)期?

A：根據(jù)上述細(xì)胞生長曲線，為了確?；盍?，必須使細(xì)胞保持在對(duì)數(shù)期就傳代，所以一定不能等到細(xì)胞長滿100%融合時(shí)才去消化傳代。一般細(xì)胞長到 70% -80%左右即可傳代。

Q：一般細(xì)胞傳代都是1分2嗎?

A：要根據(jù)不同細(xì)胞而定，如有的生長很快，比如說4T1細(xì)胞，傳代取離心懸液的十分之一就已經(jīng)足夠了。有的又特別慢，比如 BT474。此時(shí)我們就要多觀察摸索最合適的傳代比例。

Q：消化很關(guān)鍵嗎?

A：不得不說，細(xì)胞狀態(tài)差，很多時(shí)候與傳代時(shí)胰酶消化密切相關(guān)。一般腫瘤細(xì)胞消化1-2min即可。但是每一種細(xì)胞貼壁能力不同，因此對(duì)胰酶的反應(yīng)也不同，我們需要密切跟蹤。一般肉眼觀察到貼壁細(xì)胞層能移動(dòng)即可終止;而非細(xì)胞全部分散成單個(gè)。如下圖分別是正確和錯(cuò)誤的消化時(shí)間：

Q：部分比較難消化的細(xì)胞怎么辦?

A：可放于37℃培養(yǎng)箱消化。以MDA-MB-231/PAX紫杉醇耐受細(xì)胞為例，放于37℃培養(yǎng)箱消化5-8min，輕輕拍打，才見細(xì)胞成片移動(dòng)，因此針對(duì)難消化細(xì)胞一定要在顯微鏡下密切觀察。

Q：幾天換培養(yǎng)基?

A：正常情況下，培養(yǎng)液偏紅色。如果細(xì)胞維持在pH6.5～6.6條件下，培養(yǎng)基變黃，說明培養(yǎng)液中代謝產(chǎn)物已堆積到一定量，細(xì)胞會(huì)脫落死亡，需要更換新鮮培養(yǎng)液。一般細(xì)胞生長旺盛時(shí)1～2天換一次，生長緩慢時(shí)，3～4天亦可。針對(duì)復(fù)蘇后的細(xì)胞，建議隔天換液。

Q：每天觀察細(xì)胞有必要嗎?

A：一般的腫瘤細(xì)胞我們是隔天傳代，但是切不可忽略對(duì)細(xì)胞的觀察，一定要每天都要去看一下細(xì)胞，肉眼觀察培養(yǎng)基狀況、顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀況。記住，是每天。

Q：如果細(xì)胞形態(tài)不清晰或有異物等，如何處理?

A：可以考慮如下操作：首先，倒掉舊的培養(yǎng)基，用新的培養(yǎng)基或者PBS洗滌2-3次，再開始正式的消化、吹打。其次，把吹打下來的細(xì)胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。后續(xù)再密切觀察。

Q：細(xì)胞污染怎么辦?

A：如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染，一般建議丟棄。如果細(xì)胞非常寶貴，可試著加入含抗生素的培養(yǎng)基反復(fù)清洗，并用抗生素含量高的培養(yǎng)基培養(yǎng)，并經(jīng)常更換培養(yǎng)基;