小鼠輸尿管上皮細胞培養(yǎng)試劑盒說明書

規(guī)格：96T/48T

用途：用于檢測血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液等樣本中雞極低密度脂蛋白(VLDL)的濃度。

使用前請仔細閱讀說明書。如果有任何問題，請聯(lián)系我們。

具體保質(zhì)期請見試劑盒外包裝標簽。請在保質(zhì)期內(nèi)使用試劑盒。聯(lián)系時請?zhí)峁┊a(chǎn)品貨號、生產(chǎn)日期（見盒簽），以便我們更高效為您服務。

【試劑盒性能】

物理性能：各液體組分澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應真空包裝，無破損漏氣。

校準曲線線性：校準品劑量反應曲線相關(guān)系數(shù) r 值，大于等于 0.9900。

精密度：批內(nèi)變異系數(shù) CV%小于 10%；批間變異系數(shù) CV%小于 15%。

回收率：回收率在 85%-115%之間。

敏感性：本試劑盒識別雞極低密度脂蛋白(VLDL)，與結(jié)構(gòu)類似物無交叉。

穩(wěn)定性：2℃-8℃保存，有效期 6 個月。

樣品收集、處理及保存方法

1）血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2）血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3）細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4）組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液

5）保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備

1）標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。

2）洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作注意事項

1）試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

2）實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

3）不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

4）使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

5）使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6）洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

7）底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

8）加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

9）按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

操作步驟

1）使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。

2）根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內(nèi)。

3）加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。

4）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

5）每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

7）每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

8）取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結(jié)果。

9）在450nm波長處測定各孔的OD值。

局限

6號標準品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到精確的結(jié)果。

試劑盒性能

1. 靈敏度：最小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

2. 特異性：不與其它細胞因子反應。

3. 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

結(jié)果判斷與分析

1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的待測物質(zhì)標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的待測物質(zhì)含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。