安捷倫的規(guī)范操作

1. 目的：明確安捷倫高效液相色譜儀的規(guī)范操作，確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

2. 范圍：適用于安捷倫高效液相色譜儀。

3. 職責(zé)：檢驗(yàn)人員對(duì)此負(fù)責(zé)。

4. 操作規(guī)程：

4.1 系統(tǒng)組成

本系統(tǒng)由1個(gè)溶劑二元輸送泵（分主/A泵和副/B泵）、手動(dòng)進(jìn)樣閥、柱溫箱、檢測(cè)器、化學(xué)工作站和電腦等組成。

4.2 準(zhǔn)備

4.2.1使用前應(yīng)根據(jù)待檢樣品的檢驗(yàn)方法準(zhǔn)備所需的流動(dòng)相，用合適的0.45μm濾膜過(guò)濾，超聲脫氣20min。

4.2.2 根據(jù)待檢樣品的需要更換合適的色譜柱（柱進(jìn)出口位置應(yīng)與流動(dòng)相流向一致）和定量環(huán)。

4.2.3 配制樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液（也可在平衡系統(tǒng)時(shí)配制），用合適的0.45μm濾膜過(guò)濾。

4.2.4 檢查儀器各部件的電源線、數(shù)據(jù)線和輸液管道是否連接正常

4.1 將待測(cè)樣品按要求前處理，準(zhǔn)備HPLC 所需流動(dòng)相，檢查線路是否連接完好，廢液瓶是否夠用等。

4.3開(kāi)機(jī)：

4.3.1 打開(kāi)計(jì)算機(jī),進(jìn)入中文Windows XP畫(huà)面,并運(yùn)行CAG Bootp Server程序。

4.3.2 打開(kāi) 1200 LC 各模塊電源。

4.3.3 待各模塊自檢完成后，雙擊[Instrument 1 Online]圖標(biāo)，化學(xué)工作站自動(dòng)與1200LC通訊，進(jìn)入的工作站畫(huà)面如下所示。

4.3.4 從[視圖]菜單中選擇[方法和運(yùn)行控制]畫(huà)面, 點(diǎn)擊[視圖]菜單中的[顯示頂部工具欄]， [ 顯示狀態(tài)工具欄]，[系統(tǒng)視圖],[樣品視圖]，使其命令前有[√]標(biāo)志，來(lái)調(diào)用所需的界面。

4.3.5 把流動(dòng)相放入溶劑瓶中。

4.3.6 打開(kāi)沖洗閥。

4.3.7 點(diǎn)擊[泵]圖標(biāo)，點(diǎn)擊[設(shè)置泵…]選項(xiàng)，進(jìn)入泵編輯畫(huà)面。

4.3.8 設(shè)流速：5ml/min，點(diǎn)擊[確定]。

4.3.9 點(diǎn)擊[泵] 圖標(biāo)，點(diǎn)擊[控制…]選項(xiàng)，選中[啟動(dòng)]，點(diǎn)擊[確定] ，則系統(tǒng)開(kāi)始沖洗，直到管線內(nèi)（由溶劑瓶到泵入口）無(wú)氣泡為止,切換通道繼續(xù)沖洗，直到所有要用通道無(wú)氣泡為止。

4.3.10 點(diǎn)擊[泵] 圖標(biāo)，點(diǎn)擊[控制…]選項(xiàng)，選中[關(guān)閉]，點(diǎn)擊[確定]關(guān)泵， 關(guān)閉沖洗閥。

4.3.11 點(diǎn)擊[泵]圖標(biāo)，點(diǎn)擊 [設(shè)置泵…選項(xiàng)]，設(shè)流速：1.0ml/min。

4.3.12 點(diǎn)擊泵下面的瓶圖標(biāo)，如下圖所示（以單元泵為例），輸入溶劑的實(shí)際體積和瓶體積。 也可輸入停泵的體積，點(diǎn)擊[確定]。

4.4 數(shù)據(jù)采集方法編輯

4.4.1開(kāi)始編輯完整方法：從[方法]菜單中選擇[編輯完整方法…] 項(xiàng)，如下圖所示選中除[數(shù)據(jù)分析 ]外的三項(xiàng)，點(diǎn)擊[確定]，進(jìn)入下一畫(huà)面。

4.4.2方法信息

4.4.2.1在[方法注釋]中加入方法的信息（如：測(cè)試方法）。

4.4.2.2 點(diǎn)擊 [確定]， 進(jìn)入下一畫(huà)面。

4.4.3 泵參數(shù)設(shè)定

4.4.3.1 在[流速]處輸入流量,如1ml/min，在[溶劑 B]處輸入80.0,(A=100-B) ,也可[插入 ]一行[時(shí)間表] ,編輯梯度。在[壓力限]處輸入柱子的耐高壓，以保護(hù)柱子。

4.4.3.2 點(diǎn)擊[確定]，進(jìn)入下一畫(huà)面。

4.4.4 柱溫箱參數(shù)設(shè)定

4.4.4.1 在[溫度]下面的空白方框內(nèi)輸入所需溫度,如：40度。并選中它,點(diǎn)擊[更多>>] 鍵,如圖所示,選中[與左側(cè)相同]，使柱溫箱的溫度左右一致。

4.4.4.2 點(diǎn)擊[確定]，進(jìn)入下一畫(huà)面。

4.4.5 檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定：檢測(cè)波長(zhǎng)：一般選擇吸收處的波長(zhǎng)。樣品帶寬：一般選擇吸收值一半處的整個(gè)寬度

參比波長(zhǎng)：一般選擇在靠近樣品信號(hào)的無(wú)吸收或低吸收區(qū)域 。

                         參比帶寬：至少要與樣品信號(hào)的帶寬相等，許多情況下用100nm作為缺省值。同時(shí)可以輸入采集光譜方式，步長(zhǎng)，范圍，閾值。選中所用的燈。

4.4.6 在[ 運(yùn)行時(shí)選項(xiàng)表 ]中選中[ 數(shù)據(jù)采集]，點(diǎn)擊[確定]。

4.4.7 點(diǎn)擊[方法]菜單，選中[方法另存為…]，輸入一方法名，如[測(cè)試]，點(diǎn)擊[確定]。

4.4.8 從菜單 [視圖]中選中[在線信號(hào)],選中[信號(hào)窗口1],然后點(diǎn)擊[改變…] 鈕,將所要繪圖的信號(hào)移到右邊的框中,點(diǎn)擊[確定]。(如同時(shí)檢測(cè)二個(gè)信號(hào),則重復(fù)10,選中[信號(hào)窗口2]。單擊[改變]鍵，即可彈出右側(cè)的[編輯信號(hào)圖譜]窗口，進(jìn)而選擇所需的譜圖信號(hào)。

4.4.9 從[運(yùn)行控制]菜單中選擇[樣品信息]選項(xiàng)，如下圖所示，輸入操作者名稱，如[安裝工程師]；在[數(shù)據(jù)文件 ]中選擇[手動(dòng)]或[前綴/計(jì)數(shù)器]。區(qū)別: 手動(dòng)--每次做樣之前必須給出新名字,否則儀器會(huì)將上次的數(shù)據(jù)覆蓋掉。 Pr—在前綴/計(jì)數(shù)器----[前綴]框中輸入前綴，在[計(jì)數(shù)器]框中輸入計(jì)數(shù)器的起始位，儀器會(huì)自動(dòng)命名，如vwd數(shù)據(jù)0001，vwd數(shù)據(jù)0002……。

4.4.10 點(diǎn)擊[確定] ,從[儀器] 菜單選擇[系統(tǒng)開(kāi)啟]。

4.4.11 等儀器準(zhǔn)備好，基線平穩(wěn)，用試樣溶液清洗注射器，并排除氣泡后抽取適量。

4.5 數(shù)據(jù)分析方法編輯:

4.5.1 從[視圖]菜單中，點(diǎn)擊[數(shù)據(jù)分析]進(jìn)入數(shù)據(jù)分析畫(huà)面。

4.5.2 從[文件]菜單選擇[調(diào)用信號(hào)]，選中您的數(shù)據(jù)文件名，如下圖所示。點(diǎn)擊[ 確定]，則數(shù)據(jù)被調(diào)出。

4.5.3做譜圖優(yōu)化：從[圖形]菜單中選擇[信號(hào)選項(xiàng)]，如下圖所示。從[范圍] 中選擇[滿量程] 或[自動(dòng)量程] 及合適的時(shí)間范圍或選擇[自定義量程] 調(diào)整。反復(fù)進(jìn)行，直到圖的比例合適為止。點(diǎn)擊[ 確定]。

4.6積分:

4.6.1 從[積分]菜單中選擇[積分事件]選項(xiàng)，如下圖所示。選擇合適的[斜率靈敏度]，[峰寬]，[最小峰面積]，[最小峰高]。

4.6.2 從[積分]菜單中選擇[積分]選項(xiàng)， 則數(shù)據(jù)被積分。

4.6.3如積分結(jié)果不理想，則修改相應(yīng)的積分參數(shù)，直到滿意為止。

4.6.4點(diǎn)擊左邊[√]圖標(biāo)，將積分參數(shù)存入方法。

4.7打印報(bào)告:

4.7.1從[報(bào)告]菜單中選擇[設(shè)定報(bào)告]選項(xiàng)，進(jìn)入如下圖所示畫(huà)面。

4.7.2 點(diǎn)擊[定量結(jié)果]框中[計(jì)算]右側(cè)的黑三角，選中[面積百分比]，其它選項(xiàng)不變。

4.7.3 點(diǎn)擊[ 確定]。

4.7.4 從[報(bào)告]菜單中選擇[打印報(bào)告]，則報(bào)告結(jié)果將打印到屏幕上，如想輸出到打印機(jī)上，則點(diǎn)擊[報(bào)告] 底部的[打印]鈕。

4.8關(guān)機(jī):關(guān)機(jī)前，先關(guān)燈，用相應(yīng)的溶劑充分沖洗系統(tǒng)。退出化學(xué)工作站，依提示關(guān)泵，及其它窗口，關(guān)閉計(jì)算機(jī)。關(guān)閉Agilent 1200各模塊電源開(kāi)關(guān)。

4.9. 液相色譜日常維護(hù)

4.9.1. 貯液器

清潔是保持流動(dòng)相貯液器正常使用的關(guān)鍵，要盡可能使用HPLC級(jí)的溶劑和試劑含有緩沖鹽和非HPLC級(jí)的流動(dòng)相一定要通過(guò)0.45μm的過(guò)濾器以除去其中的微粒物質(zhì)。改變流動(dòng)相時(shí)應(yīng)防止交叉污染，陳舊的流動(dòng)相和用久了的試劑瓶應(yīng)定期廢棄，防止生長(zhǎng)微生物和組分改變。貯器內(nèi)壁定期清洗，里面的附件要經(jīng)常更換。

4.9.2. 泵

泵的密封圈是最易磨損的部件，密封墊圈的損壞可引起系統(tǒng)的許多故障。采取下列措施可以延長(zhǎng)墊圈的壽命：

A 每天要把泵中的緩沖液體洗干凈，防止鹽沉積，泵要浸在無(wú)緩沖液的溶液或有機(jī)溶劑中；

B 用HPLC級(jí)試劑；

C 用燒結(jié)不銹鋼沉子。要注意防止因泵阻塞造成壓力過(guò)高而損壞柱塞桿或燒壞電機(jī)。

4.9.3. 進(jìn)樣器

停機(jī)后要用溶劑沖洗干凈進(jìn)樣器內(nèi)殘留的樣品和緩沖鹽，防止無(wú)機(jī)鹽沉積和樣品微粒造成閥轉(zhuǎn)子面磨損或阻塞，嚴(yán)禁用氣相色譜那樣的尖針頭進(jìn)樣。

4.9.4. 色譜柱

防止柱性能下降有以下幾方面的措施：

A 溶劑的化學(xué)腐蝕不能太強(qiáng)；

B 避免微粒在柱頭沉降；

C 泵上要裝壓力限制器，防止壓力過(guò)高沖擊大；

D 流動(dòng)相pH>7時(shí)用大粒度同種填料作預(yù)柱；

E 柱頭加燒結(jié)片不銹鋼濾片，需要時(shí)加保護(hù)柱；

4.9.5. 檢測(cè)器

要保持檢測(cè)器清潔，每天用后連同色譜柱柱一起沖洗。提倡不定期用強(qiáng)溶劑

反向沖洗檢測(cè)池（拆開(kāi)柱）。用脫過(guò)氣的流動(dòng)相，防止空氣泡卡在池內(nèi)。檢測(cè)器燈有一定的壽命，不用時(shí)不要打開(kāi)燈。

5.0. 當(dāng)儀器出現(xiàn)故障時(shí)應(yīng)及時(shí)與廠家聯(lián)系，使用人員不得擅自拆開(kāi)維修。

5.1. 使用人員應(yīng)經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的且熟練操作儀器，每次使用應(yīng)進(jìn)行使用登記。

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