與核酸純化相比，蛋白純化可是一項(xiàng)相當(dāng)艱苦的工作。純化時(shí)間長(zhǎng)，操作步驟繁瑣。有時(shí)，在實(shí)驗(yàn)室呆了一整天，換來(lái)的卻是讓人傷心的結(jié)果，蛋白得率低，純度差。這時(shí)你也許會(huì)想，如果純化蛋白像提質(zhì)粒一樣簡(jiǎn)單就好了。

如今，你的夢(mèng)想成真了。Clontech（Takara旗下）推出了新一代的蛋白純化試劑盒 – His-Tagged Purification Miniprep Kit。真的就像質(zhì)粒純化一樣，加樣、結(jié)合、清洗、溶出，幾次離心，5分鐘即可純化出100 μg His-tag融合蛋白。

這個(gè)系統(tǒng)在純化柱中安裝了尼龍膜，能夠在室溫下快速操作，無(wú)需等待，并且與哺乳動(dòng)物和細(xì)菌的細(xì)胞兼容。細(xì)胞裂解液中通常有各種添加劑存在，比如β-巰基乙醇、EDTA、DTT、甘油等，沒(méi)關(guān)系，這個(gè)系統(tǒng)也能穩(wěn)定發(fā)揮高性能。

純化柱中的尼龍膜經(jīng)過(guò)改良，膜的表面積大，能產(chǎn)生高純度、濃縮的蛋白質(zhì)。通過(guò)這種技術(shù)，尼龍膜的蛋白結(jié)合能力可媲美樹(shù)脂，甚至更強(qiáng)。與樹(shù)脂相比，膜的滴下速度快，可在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行純化。柱床體積小，可進(jìn)行少量、高濃度的溶出。

從2-5 ml培養(yǎng)液中制備出200-800 μl細(xì)胞裂解液，加入純化柱后經(jīng)過(guò)平衡、結(jié)合、洗滌和溶出，5分鐘即可完成純化，zui多獲得100 μg His-tag融合蛋白。濃度大約在0.3-1 mg/ml。操作流程簡(jiǎn)便，時(shí)間短，可降低蛋白質(zhì)降解或活性損失的風(fēng)險(xiǎn)，讓下游應(yīng)用的成功率更高。

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