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如何對(duì)液相色譜儀的分離條件進(jìn)行優(yōu)化？

閱讀：519發(fā)布時(shí)間：2022-8-25

液相色譜儀利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異，對(duì)混合物進(jìn)行先分離，而后分析鑒定的儀器。根據(jù)固定相是液體或是固體，又分為液-液色譜(LLC）及液-固色譜(LSC）。對(duì)高沸點(diǎn)、難氣化合物的混合物通過(guò)色譜柱和淋洗劑并以實(shí)現(xiàn)分離。系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過(guò)程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過(guò)檢測(cè)器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來(lái)。在該儀器的使用中，應(yīng)對(duì)其分離條件進(jìn)行優(yōu)化。


    如何對(duì)液相色譜儀的分離條件進(jìn)行優(yōu)化？
    1、減少色譜柱柱內(nèi)展寬，提高柱效
? （1）流速：從H-U曲線可知，HPLC的******流速在流速很小處，減少流速有利于提高柱效，但在實(shí)踐中為加快分析速度，常采用比******流速高數(shù)倍的流速。
    （2）流動(dòng)相：選用低粘度的流動(dòng)相，有利于增大液相色譜儀分析樣品組分在溶劑中的擴(kuò)散系數(shù)Dm，減少傳質(zhì)阻力。
? （3）色譜柱柱溫：適當(dāng)提高液相色譜儀柱溫，可降低流動(dòng)相粘度，減少傳質(zhì)阻力，但柱溫升高將使分辨率降低，柱壽命短，易產(chǎn)生氣泡，一般在室溫下進(jìn)行。
    （4）固定相：
     ①粒度小，均勻，以減小渦流擴(kuò)散和流動(dòng)相傳質(zhì)阻力；
     ②改進(jìn)結(jié)構(gòu)，盡可能采用大孔徑和淺孔道的表面多孔型載體或全多孔微粒型載體，減少滯留流動(dòng)相傳質(zhì)阻力。
? 2、色譜柱柱外展寬
?? 色譜柱柱外譜帶展寬又稱“柱外效應(yīng)"，系指從液相色譜儀進(jìn)樣點(diǎn)到檢測(cè)池之間除柱子本身以外的所有死體積所引起的色譜峰展寬，色譜柱柱效下降。可分為：
? （1）色譜柱柱前展寬  主要由進(jìn)樣引起，減小進(jìn)樣器的死體積，用閥門進(jìn)樣可減少柱前譜帶展寬，提高柱效。
    （2）色譜柱柱后展寬  主要由接管、檢測(cè)器流通池體積及檢測(cè)器響應(yīng)時(shí)間等因素所引起。因此，盡可能用短而內(nèi)徑細(xì)的接管，減少流通池體積，改進(jìn)液相色譜儀檢測(cè)器和記錄系統(tǒng)的響應(yīng)速度等都是克服柱后展寬的途徑。
分析結(jié)束后反復(fù)沖洗進(jìn)樣口，防止樣品的交叉污染或堵塞。


    注：液相色譜儀由高壓、進(jìn)樣系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、色譜柱、檢測(cè)器、信號(hào)記錄系統(tǒng)等部分組成。應(yīng)用于生物化學(xué)、生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境化學(xué)、石油化工等部門。
PS 成都摩爾科學(xué)儀器有限公司提供的產(chǎn)品系列包括：各類食品檢測(cè)和藥品檢測(cè)涉及的從分析到制備等規(guī)格齊全、填料齊全的液相色譜柱、氣相色譜柱、 純化填料、品種規(guī)格齊全樣品前處理固相萃取柱和免疫親和柱；檢測(cè)的色譜柱以及純化用的系統(tǒng)成套設(shè)備和各種填料；同時(shí)，成都摩爾科學(xué)儀器有限公司也是各品牌色譜柱、儀器的配件耗材(如氘燈、石墨管、單向閥等）、常規(guī)實(shí)驗(yàn)室消耗品(如針頭過(guò)濾器(含滅菌器)、過(guò)濾膜(含除菌膜）、樣品瓶(含頂空瓶）及相關(guān)蓋墊、 移液器、標(biāo)準(zhǔn)品(食品和環(huán)境等）和各種分析檢測(cè)儀器(如液相色譜儀、氣相色譜儀、培養(yǎng)箱、生物安全柜、天平、pH計(jì)等綜合集成供應(yīng)商。（）

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