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液相色譜使用中樣品預(yù)處理注意事情

閱讀：868發(fā)布時間：2022-8-24

摘要：高效液相色譜具有分離效率高、分析速度快和應(yīng)用范圍廣等特點(diǎn)，特別適合于高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性和熱穩(wěn)定性差的化合物的分離分析。
目前，高效液相色譜已成為化學(xué)、生化、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)業(yè)、環(huán)保、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離技術(shù)，是分析化學(xué)家和生物化學(xué)家手中用于解決他們面臨的各種實(shí)際分析和分離課題的工具之一。
雖然，在檢測分析中使用了昂貴的、性能*的高檔精密儀器，但是，由于在樣品的前處理，標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備，樣品液的測定，分析中的污染，儀器常見故障等問題上的不注意，而引起大的系統(tǒng)誤差，使整個測定分析失敗。
現(xiàn)***液相色譜分析的應(yīng)用中樣品預(yù)處理注意的幾個環(huán)節(jié)，作簡要分析,以達(dá)到更好的檢測效果。
樣品預(yù)處理方法
樣品預(yù)處理應(yīng)包括進(jìn)樣前的一切操作，除了稱重、溶解、稀釋等步驟外，樣品需要：
①過濾；
②萃??；
③衍生化(柱前衍生)；
④液相色譜(低壓柱層析)
這些操作可以是手工進(jìn)行或?qū)嵭凶詣踊僮?，樣品預(yù)處理的目的是除去干擾物、增加檢測器靈敏度(富集)、保護(hù)色譜柱等。樣品預(yù)處理同時也是為了避免色譜分離故障，其中，樣品萃取是關(guān)鍵的一步，要從大量的干擾物中萃取出微量組分難度極大。
有些樣品經(jīng)預(yù)處理后還不能作進(jìn)樣分析，需進(jìn)行衍生化處理，使一些無紫外吸收或無熒光的組分，經(jīng)過衍生化后能用紫外和熒光檢測器檢測,這樣既提高了靈敏度，又改善了分離度(質(zhì)量變化)。樣品預(yù)處理的同時也會帶來一些問題，如，樣品損失、樣品被污染、衍生化反映不******或多種反應(yīng)物生成等。。。衍生反應(yīng)常會影響試驗(yàn)的******度，或者在整個樣品預(yù)處理過程中帶來誤差。
用于液相色譜分析的樣品溶液必須均勻而無顆粒，有顆粒會損壞進(jìn)樣器并阻塞柱頭。處理好的樣品在準(zhǔn)備上柱前應(yīng)對準(zhǔn)光線搖動，檢查樣品溶液中有無顆粒。只要看到顆粒、混濁或乳化，***應(yīng)過濾一下，過濾膜要能截留住0.15μm以上的顆粒，樣品過濾的過程中可能引起：樣品被污染，因，過濾吸附降低樣品組分的含量，樣品溶劑揮發(fā)引起誤差。
萃取的目的是從共溶的樣品介質(zhì)中分離出被分析的組分，或者，減少損壞柱的物質(zhì)(如，蛋白質(zhì)等)和干擾物。一般采用有機(jī)溶劑萃取，要求萃取用的溶劑毒性低、揮發(fā)性好、雜質(zhì)少、對待測樣品有良好的溶解度且又與水不相混溶。
常用的有、醋酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、苯或者兩種以上的混合溶劑。萃取后一般可直接進(jìn)樣，有時需要濃縮或吹干濃縮，再用定體積的液體或流動相溶解進(jìn)樣。這樣增加了樣品濃度,提高了靈敏度，同時，避免了溶劑峰對樣品峰的干擾。在萃取是要考慮樣品分子的溶解能力。除了脂溶性和水溶性組分外，還有用脂溶性的組分制成水溶性的鹽，萃取方法如下：
水溶性樣品
（1）酸性組分及生成的鹽萃取方法：
有機(jī)溶劑萃取雜質(zhì)后調(diào)成酸性，再加有機(jī)溶劑萃取或進(jìn)樣，或在N2流下吹干，用適當(dāng)?shù)娜軇┙夂筮M(jìn)樣。
（2）堿性組分及生成的鹽萃取方法：
有機(jī)溶劑萃取雜質(zhì)后調(diào)成堿性，再加有機(jī)溶劑萃取或進(jìn)樣，或在N2流下吹干，用適當(dāng)?shù)娜軇┤芙夂筮M(jìn)樣。
3）中性組分萃取方法：
①有機(jī)溶劑萃取雜質(zhì)后，直接用反相色譜法分析；
②脂溶性組分萃取方法:有機(jī)溶劑萃取或進(jìn)樣，或在N2流下吹干，用適當(dāng)?shù)娜軇┤芙夂筮M(jìn)樣；
分析中的污染
一般檢測的環(huán)境、容器、試劑都是影響測定結(jié)果的因素。
①環(huán)境污染
儀器室的有害氣體、氣溶液、灰塵等等都能造成污染，影響檢測結(jié)果，這種污染很難校正。因此，儀器室與其他實(shí)驗(yàn)室應(yīng)隔離，保持清潔，儀器室內(nèi)應(yīng)安裝空調(diào)，注意：防潮、防腐、防震、空氣相對濕度應(yīng)小于70 %為宜。
②容器
實(shí)驗(yàn)室常用的器皿有玻璃類、瓷類、石英類、塑料類等，在進(jìn)行分析時，應(yīng)按照待則樣品的要求來選則器皿，不管使用哪種器皿，容器的洗條清潔都是很重要的，也是取得好的檢測結(jié)果的基本******。
③試劑
在液相色譜分析中，所選用的試劑必須是色譜純、優(yōu)級純或分析純，如果，用含量有雜質(zhì)的試劑，則會出現(xiàn)雜峰而影響測定結(jié)果。
標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置
在配置標(biāo)準(zhǔn)溶液時，先要配置現(xiàn)定濃度的內(nèi)標(biāo)溶液，在標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液中******使用同一批次配制的內(nèi)標(biāo)溶液以減少誤差。
(1)配制標(biāo)準(zhǔn)溶液的物質(zhì)應(yīng)當(dāng)是色譜純的、性質(zhì)穩(wěn)定。
(2)常用的標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)存放在棕色溶液瓶中低溫保存。
(3)在配制維生素類標(biāo)準(zhǔn)品時,要放置在棕色容量瓶中或避光放置以免分解。

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