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閱讀:167發(fā)布時間:2017-8-21
ELISA試劑盒: 在搜集樣本前都有必要有一個完整的方案,有必要清楚要檢測的成份是否滿足安穩(wěn)。對搜集后當天就進行 檢測的樣本,及時儲存在4℃?zhèn)溆谩jP于隔天再檢測的樣本,及時分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆?,有條件的,-70℃凍存?zhèn)溆?。標本應防止重復凍融?
液體類標本: 包含血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培育上清等。
1. 血清:ELISA試劑盒室溫血液天然凝結10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。細心搜集上清。保存過程中如有沉積構成,應再次離心。 2. 血漿: 應根據(jù)標本的要求挑選EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。細心搜集上清。保存過程中如有沉積構成,應再次離心。
3. 尿液 用無菌管搜集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。細心搜集上清。保存過程中如有沉積構成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實施。
4. 細胞培育上清:檢測排泄性的成份時,用無菌管搜集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。細心搜集上清。
5. 培育細胞:檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。經(jīng)過重復凍融或參加安排蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。細心搜集上清。保存過程中如有沉積構成,應再次離心。
6. 安排標本:切開標本后,稱取分量。參加一定量的PBS,PH7.4。用液氮敏捷冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笠廊粓猿?-8℃的溫度。參加一定量的PBS(PH7.4),或安排蛋白萃取試劑, 用手藝或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。細心搜集上清。分裝后一份待檢測,其他冷凍備用。
ELISA試劑盒是以免疫學反應為基礎,將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的實驗技能。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行,每參加一種試劑孵育后,可經(jīng)過洗刷除掉剩余的游離反應物,從而確保實驗成果的特異性與安穩(wěn)性。在實際應用中,經(jīng)過不同的規(guī)劃,具體的辦法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。
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