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技術(shù)文章

白介素elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)中問(wèn)題分析

閱讀:443發(fā)布時(shí)間:2017-6-13

1.白介素elisa試劑盒孵育反應(yīng)時(shí)間不足
定時(shí)鐘準(zhǔn)確定時(shí)
2.洗滌時(shí)沖擊力太大,洗滌液浸泡時(shí)間太長(zhǎng),洗滌次數(shù)增加
減少洗滌沖擊力,按說(shuō)明書要求保留洗滌時(shí)間,準(zhǔn)確記住洗滌次數(shù)
3.顯色劑滴加量不足或順序顛倒,或混合后加入
滴加顯色液時(shí),滴瓶垂直向下,持力均勻,滴速不宜過(guò)快,先加顯色劑 A,反加顯色劑B,不可將A、B液混合后加入
4.顯色劑反應(yīng)時(shí)間不足
準(zhǔn)確定時(shí)
5.蒸餾水水質(zhì)有問(wèn)題
測(cè)定蒸餾水配制試劑對(duì)酶免疫法的影響
6.試劑盒在運(yùn)輸途中時(shí)間太長(zhǎng),溫度太高
白介素elisa試劑盒置保溫箱內(nèi)運(yùn)輸,并放足夠數(shù)量的冰塊,盡量縮短運(yùn)輸時(shí)間
7.試劑、樣品用前未能平衡
用前試劑、樣品置室溫平衡 30分鐘左右。
8.樣品和NaN 3 防腐,抑制了酶的反應(yīng)
樣品不能加 NaN 3 防腐
9.試劑盒超過(guò)有效期
超過(guò)效期試劑盒不要使用
10.試劑開啟時(shí)間過(guò)長(zhǎng)長(zhǎng)菌
試劑開啟后請(qǐng)盡量在短時(shí)間內(nèi)用完
11.移液器吸量不足,移液抽吸排放太快,吸頭內(nèi)壁掛液太多或內(nèi)壁不清潔
 校正移液器,吸頭要配套,每次裝吸頭要吻合緊密。移液不宜過(guò)快,排放應(yīng)*。吸頭內(nèi)壁要清潔,一次性使用。
12.恒溫箱溫度不足37℃或水浴鍋水溫度不足37℃)放入反應(yīng)板時(shí)注意培養(yǎng)箱溫度,及時(shí)調(diào)整,孵育反應(yīng)期間開啟不宜太多,影響溫度平衡。
ELISA測(cè)定模式包括以下幾種:雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競(jìng)爭(zhēng)抑制法,其中競(jìng)爭(zhēng)抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時(shí)差所引起的不公平競(jìng)爭(zhēng)等因素的影響,結(jié)果重復(fù)性較差,質(zhì)量較難控制。
不同批次的白介素elisa試劑盒在制作過(guò)程中很難保證質(zhì)量*一致,即使是通過(guò)批批檢的項(xiàng)目其檢測(cè)結(jié)果也存在差異,因此必須選擇和訂購(gòu)長(zhǎng)批號(hào)的試劑,并保證保存條件。嚴(yán)格執(zhí)行這一標(biāo)準(zhǔn)可以避免因試劑批號(hào)改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評(píng)估試劑的復(fù)雜過(guò)程,并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性;對(duì)于效期短、使用率低的試劑,應(yīng)當(dāng)小量分裝,每次使用則取分裝部分即可,避免反復(fù)凍融造成試劑的失效。


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