ELISA試劑盒以吸光度為縱坐標(biāo)，將各濃度的值逐點(diǎn)連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，*較呈直線的部分是的檢測區(qū)域。
因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA試劑盒，標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬，曲線zui高點(diǎn)的吸光度可接近2.0，繪制時(shí)常用半對數(shù)紙，以檢測物的濃度為橫坐標(biāo)。
酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。
如有細(xì)菌污染，菌體中能夠富含內(nèi)源性HRP，有國內(nèi)報(bào)導(dǎo)酶免HAg試劑檢測溶血標(biāo)本時(shí)可構(gòu)成假陽性。如在冰箱中保管過久，其間的IgG可發(fā)作聚合，在直接法ELISA試劑盒中可使本底加深。
內(nèi)源性煩擾物：類風(fēng)濕因子(RF)、黃疸等，類風(fēng)濕因子是可作用于多種動物以及人IgGFc段的本身抗體，大都為IgM類，能充任抗原成分與固相及酶標(biāo)抗體反響，然后出現(xiàn)非特異性顯色。
黃疸血標(biāo)本中常富含內(nèi)源性過氧化物酶，如用辣根過氧化物酶為符號物，就有能夠發(fā)作非特異性顯色。
血標(biāo)本在收集處置時(shí)應(yīng)留心，在冰箱中保管不易過久。
ELISA試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。
先將*標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，ELISA試劑盒加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。
影響ELISA試劑盒中非特異性顯色的緣由許多，如試劑盒特異性、查驗(yàn)標(biāo)本中含酶符號物的煩擾物，操作進(jìn)程中的疑問。
外源性煩擾物，常常因樣品收集、儲存、處置不妥構(gòu)成如樣品溶血，被細(xì)菌污染，標(biāo)本凝聚不全等。
溶血標(biāo)本，紅細(xì)胞溶解割裂，釋放出血紅素構(gòu)成，而血紅素中的鐵卟啉是過氧化物酶的類似物，以HRP為符號的ELISA測定中，溶血標(biāo)本能夠會添加非特異性顯色。
ELISA試劑盒顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。ELSIA操作步驟復(fù)雜，影響反應(yīng)因素較多，特別是固相載體的包被難達(dá)到各個體之間的一致.
有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。
ELISA試劑盒底物作用一段時(shí)間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。
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