在競爭法ELISA中，陰性孔呈色深于陽性孔。陰性呈色的強(qiáng)度取決于反應(yīng)中酶結(jié)合物的濃度和加入競爭抑制物的量，一般調(diào)節(jié)陰性對照的吸光度在 1.0-1.5 之間，此時(shí)反應(yīng)zui為敏感。競爭法 ELISA 不易用自視判斷結(jié)果，因肉眼很難辨別弱陽性反應(yīng)與陰性對照的顯色差異，一般均用比色計(jì)測定，讀出S、P 和N 的吸光值。計(jì)算方法主要也有兩種，即陽性判定值法和抑制率法。
a. 陽性判定值法
與間接法和夾心法中的陽性判定值法基本相同，但在計(jì)算公式中引入陽性對照 A 值，現(xiàn)舉某種檢測抗HBc 的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照為不含抗HBc 的復(fù)鈣人血漿，陽性對照中抗HBc 含量為125±100u/ml。每次試驗(yàn)設(shè)2 個(gè)陽性對照和3 個(gè)陰性對照。測得A 值后，先計(jì)算陰性對照A 值的平均值(NC X )和陽性對照A 值的平均數(shù)(PCX)，兩個(gè)平均數(shù)的差(N-P)必須大于一個(gè)特定的數(shù)值(例如0.300),試驗(yàn)才有效。3 個(gè)陰性對照 A 值均應(yīng)小于2.000，而且應(yīng)≥0.5×NCX 并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范圍，則棄去，而以另2 個(gè)陰性對照重新計(jì)算×NCX；如有2 個(gè)陰性對照A 超出以上范圍，則該次實(shí)驗(yàn)無效。陽性
判定值按下式計(jì)算：
陰性判定值=0.4×NCX+0.6×PCX
標(biāo)本 A 值≤陽性判定值的反應(yīng)為陽性，A＞陽性判定值的反應(yīng)為陰性。
b. 抑制率法
抑制率表示標(biāo)本在競爭結(jié)合中標(biāo)本對陰性反應(yīng)顯色的抑制程度，按下式計(jì)算：
抑制率(%)= (陰性對照A 值-標(biāo)本A 值)×/陰性對照A 值一般規(guī)定抑制率≥50%為陽性，＜50%為陰性。