我們知道，ELISA的每項(xiàng)步驟都進(jìn)行*優(yōu)化后，讓實(shí)驗(yàn)達(dá)到狀態(tài)也是必然的事了。那么關(guān)于ELISA包被條件如何優(yōu)化呢？上海滬鼎給您一個(gè)的答案:
    

1.包被抗原的選擇 
    包被抗原可分為天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類。天然蛋白需經(jīng)純化 才能用直接吸附法包被，對(duì)于含雜質(zhì)較多的抗原可以采 用間接捕獲法包被(先用能 夠與目的抗原反應(yīng)的物質(zhì)如抗體直接吸附在酶標(biāo)板上，再通過特異性反應(yīng)使抗原固 相化)。經(jīng)純化的重組蛋白一般皆可直接包板。小分子 抗原比如多肽以及一些小分 子有機(jī)化合物，由于分子量太小，往往難于直接吸附在酶標(biāo)板上，一般都先使其與 無關(guān)蛋白質(zhì)如BSA等偶聯(lián)，偶聯(lián)物吸附于固相載體上。  
   

2.包被液的選擇 
    一般常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液，如果包被的抗原在堿性條件下不穩(wěn)定的話 ，也可以使用pH7.2的磷酸 鹽緩沖液。 
   

3.包被溫度的選擇 
    通常是4-8度條件下過夜或者37度保溫2小時(shí)，我們強(qiáng)烈建議4-8度條件下包被， 有利于蛋白活性的保 持。  
    

4.包被濃度的選擇 
    包被的zui適濃度隨固相載體和包被物的性質(zhì)變化，一般蛋白質(zhì)的包被濃度為1- 5ug/ml，要明確針對(duì)特定包 被抗原的zui適包被濃度需要通過實(shí)驗(yàn)來確定。 
    

    另外還有一個(gè)相關(guān)重點(diǎn)問題值得討論，包板后需要封閉嗎？應(yīng)該選擇什么樣的 封閉體系？上海滬鼎技術(shù)員特別說明：封閉是否必要，取決于ELISA的模式及具體的 實(shí)驗(yàn)條件。一般說來，雙抗體夾心法，只要酶標(biāo)記物是高活性的，操作時(shí)洗滌* ，不經(jīng)封閉也可得到滿意的結(jié)果。而在間接法測定中，封閉一般是*的。 
 

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