影響分光光度計(jì)吸光值漂移的因素
分光光度計(jì)讀數(shù)不穩(wěn)定可能是實(shí)驗(yàn)者最頭痛的問題。靈敏度越高的儀器，表現(xiàn)出的吸光值漂移越大。事實(shí)上，分光光度計(jì)的設(shè)計(jì)原理和工作原理，允許吸光值在一定范圍內(nèi)變化，即分光光度計(jì)有一定的準(zhǔn)確度和精確度。
1、核酸本身物化性質(zhì)
溶解核酸的緩沖液的pH值、離子濃度等在測試時，離子濃度太高也會導(dǎo)致讀數(shù)漂移，因此建議使用pH值一定、離子濃度較低的緩沖液（如TE）可大大穩(wěn)定讀數(shù)。核酸的吸光值受pH值和緩沖液離子濃度影響。只有在一定的pH值和低離子濃度的條件下（如10mMTris-HClpH8.0），才能得到精確的檢測結(jié)果。水的pH值不穩(wěn)定，可能導(dǎo)致檢測誤差。一些緩沖液在紫外范圍內(nèi)存在自身吸收，為了確保準(zhǔn)確測量，請使用與懸浮或洗脫樣品時相同的緩沖液。
2、樣品的稀釋濃度
樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素，由于樣品中不可避免存在一些細(xì)小的顆粒，尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測試效果。為了減少顆粒對測試結(jié)果的影響，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值在0.1-1.5A。在此范圍內(nèi)，顆粒的干擾相對較小，結(jié)果穩(wěn)定。從而意味著樣品的濃度不能過低，或者過高（超過光度計(jì)的測試范圍）。
3、分光光度計(jì)操作因素
如混合要充分，否則吸光值太低，甚至出現(xiàn)負(fù)值；混合液不能存在氣泡，空白液無懸浮物，否則讀數(shù)漂移劇烈；必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品，否則濃度差異太大；換算系數(shù)和樣品濃度單位選擇一致；不能采用窗口磨損的比色杯；樣品的體積必須達(dá)到比色杯要求的最小體積等多個操作事項(xiàng)。
會員1.png)