流動相使用前為什么要脫氣？
流動相使用前必須進行脫氣處理 ，以除去其中溶解的氣體（如O2），以防止在洗脫過程中當流動相由色譜柱流至檢測器時，因壓力降低而產(chǎn)生氣泡。氣泡會增加基線的噪音，造成靈敏度下降，甚至無法分析。溶解的氧氣還會導致樣品中某些組份被氧化，柱中固定相發(fā)生降解而改變柱的分離性能。若用FLD，可能會造成熒光猝滅。
常用的脫氣方法比較：
氦氣脫氣法：利用液體中氦氣的溶解度比空氣低，連續(xù)吹氦脫氣，效果較好，但成本高。
加熱回流法：效果較好，但操作復雜，且有毒性揮發(fā)污染。
抽真空脫氣法：易抽走有機相。
超聲脫氣法：流動相放在超聲波容器中，用超聲波振蕩10-15min，此法效果最差。
在線真空脫氣法：Agilent1100LC真空脫機利用膜滲透技術， 在線脫氣，智能控制，無需額外操作，成本低，脫氣效果明顯優(yōu)于以上幾種方法，并適用于多元溶劑體系。
1、為什么溶劑和樣品要過濾?
溶劑和樣品過濾非常重要，它會對、儀器起到保護作用，消除由于污染對分析結果的影響。
色譜柱：由于填料顆粒很細，色譜柱內(nèi)腔很小，溶劑和樣品中的細小顆粒會使色譜柱和毛細管容易堵塞。
儀器：溶劑和樣品中的細小顆粒會增加進樣閥的堵塞和磨損，同時也會增加泵頭內(nèi)的藍寶石活塞桿和活塞的磨損。
樣品過濾頭的類型：
30mm內(nèi)徑：適用于大進樣量的過濾，由0.2μm和0.45μm兩種規(guī)格,材料有纖維素,醋酸纖維,聚四氟乙烯。處理樣品體積少于50μl。
13mm內(nèi)徑：適用于范圍廣的過濾，由0.2μm和0.45μm兩種規(guī)格,材料為纖維素。
3mm內(nèi)徑：適用于小進樣量的過濾，由0.2μm和0.45μm兩種規(guī)格。處理樣品體積為7μl。
濾膜類型：
聚四氟乙烯濾膜：適用于所有溶劑，酸和鹽，并無任何可溶物。
醋酸纖維濾膜：不適用于有機溶劑，特別適用于水基溶液，推薦用于蛋白質和其相關樣品。
尼龍66濾膜：適用于絕大多數(shù)有機溶劑和水溶液，可用于強酸，70%乙醇、二氯甲烷、不適用于二甲基甲酰胺。
再生纖維素濾膜：具有蛋白吸收低，同樣適用水溶性樣品和有機溶劑。
2、為什么HPLC用緩沖鹽時要加在線Seal-wash選項？
HPLC用緩沖鹽時,由于泵頭內(nèi)的緩沖鹽溶液存在高壓析鹽現(xiàn)象,析出的細小鹽粒非常堅硬,它附著在藍寶石活塞桿上,隨著藍寶石活塞桿的往復運動,容易產(chǎn)生劃痕,并磨損密封墊,造成漏液等故障現(xiàn)象。在線Seal-wash選項能有效的帶走可能存在的緩沖鹽結晶。緩沖鹽的濃度在0.1mol或大于0.1mol時,必須使用該在線沖洗選項.
清洗液配制: 90%水+10%異丙醇.該混合液可抑制菌類生長和減小水的表面張力。以2-3滴/min的速度虹吸流下，不能干涸。
