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技術(shù)文章

SPE固相萃取的技術(shù)原理及操作步驟

閱讀：121發(fā)布時(shí)間：2025-12-20

SPE固相萃取技術(shù)的介紹說明

一. 固相萃取概念及基本原理：
    固相萃取（Solid Phase Extraction,簡稱）是從八十年代中期開始發(fā)展起來的一項(xiàng)樣品前處理技術(shù)。由液固萃取和液相色譜技術(shù)相結(jié)合發(fā)展而來。主要通過固相填料對樣品組分的選擇性吸附及解吸過程，實(shí)現(xiàn)對樣品的分離，純化和富集。主要目的在于降低樣品基質(zhì)干擾，提高檢測靈敏度。
    固相萃取的基本原理和方法：
    SPE技術(shù)基于液-固相色譜理論，采用選擇性吸附、選擇性洗脫的方式對樣品進(jìn)行富集、分離、純化，是一種包括液相和固相的物理萃取過程；也可以將其近似的看作一種簡單的色譜過程。
    （）是利用選擇性吸附與選擇性洗脫的液相色譜法分離原理。較常用的方法是使液體樣品通過一吸附劑，保留其中被測物質(zhì)，再選用適當(dāng)強(qiáng)度溶劑沖去雜質(zhì)，然后用少量良溶劑洗脫被測物質(zhì)，從而達(dá)到快速分離凈化與濃縮的目的。也可選擇性吸附干擾雜質(zhì)，而讓被測物質(zhì)流出；或同時(shí)吸附雜質(zhì)和被測物質(zhì)，再使用合適的溶劑選擇性洗脫被測物質(zhì)。
二. 方法的優(yōu)點(diǎn)
    相對于傳統(tǒng)的液液萃取法和蛋白沉淀法，具有的優(yōu)勢：
    凈化方法：LLE（液液萃?。?br>    優(yōu) 點(diǎn)：無需特殊裝置和材料
    缺 點(diǎn)：

    1.操作繁瑣，費(fèi)時(shí)
    2.需要耗費(fèi)大量的有機(jī)溶劑，導(dǎo)致高成本和對環(huán)境的污染
    3.難以從水中提取高水溶性物質(zhì)   
    凈化方法：PPT（蛋白沉淀）
    優(yōu) 點(diǎn)：操作簡單，無需特殊裝置
    缺 點(diǎn)：

    1.非特異性的沉淀反應(yīng)可能使微量的分析物隨著基質(zhì)蛋白質(zhì)共同沉淀而損失
    2.凈化效果較弱，檢測靈敏度和可靠性低   
    凈化方法：SPE（）
    優(yōu) 點(diǎn)：

    1.集樣品富集及凈化與一身，提高檢測靈敏度的方法
    2.比液液萃取更快，節(jié)省溶劑
    3.可自動化批量處理
    4.重現(xiàn)性好
    缺 點(diǎn)：

    1.使用進(jìn)口固相萃取小柱的成本較高
    2.需要專業(yè)人員協(xié)助方法開發(fā)  
三.及基本操作步驟
    1.    （1）SPE小柱
    關(guān)于：
    a.常見的固相萃取柱分為三部分：聚丙烯柱管，多孔聚丙烯篩板（20μm）和填料（多為40-60μm，80-100μm）
    b.常見規(guī)格：100mg/1ml,200mg/3ml,500mg/3ml,1g/6ml等。以100mg/1ml為例，其中100 mg
    為填料的質(zhì)量，1ml是空柱管的體積。
    c.一次性使用：為避免交叉污染，保證檢測可靠性，通常是一次性使用的。
    2）96孔板
    96孔板是高通量的SPE產(chǎn)品，每孔含少量吸附劑（10-100mg），樣品載量約2ml/孔主要用于生物，醫(yī)藥等行業(yè)小量的多樣品的凈化處理。且多與自動化的樣品處理處理裝置連用（如Tomtec液體處理工作站）。其基本原理和使用方法與SPE柱相似。
    2. （   ）
    （1）真空SPE裝置（SPE Vacuum Manifolds）組成：玻璃缸，真空壓力表，，真空緩沖瓶，收集管架，小柱連接頭，大體積取樣器，12位或24位防交叉污染裝置。
    標(biāo)配StopCock閥，精確控制流速
    試管架高度可調(diào)，滿足不同體積需要
    壓力表放空閥側(cè)面設(shè)計(jì)，使用方便
    設(shè)計(jì)緊湊、經(jīng)久耐用、性價(jià)比高
    2）
    a.醫(yī)藥/環(huán)保/刑事鑒定中自動樣品前處理
    b.自動進(jìn)行固相萃取/可多組份收集
    c.無人為影響，無乳化，節(jié)省溶劑
    d.高回收率，高重現(xiàn)性，高效率適用于各種商品萃取柱
    e.自動記錄資料，便于GLP管理
    f.特別適合于HPLC或LC/MS的樣品處理
    g.價(jià)格較高
    3.基本操作步驟
    針對填料保留機(jī)理的不同（填料保留目標(biāo)化合物或保留雜質(zhì)），操作稍有不同。
    1）填料保留目標(biāo)化合物
    固相萃取操作一般有四步：
    活化——除去柱子內(nèi)的雜質(zhì)并創(chuàng)造一定的溶劑環(huán)境。
    上樣——將樣品用一定的溶劑溶解，轉(zhuǎn)移入柱并使組分保留在柱上。
    淋洗——除去干擾物。
    洗脫——用小體積的溶劑將被測物質(zhì)洗脫下來并收集。
    2）填料保留雜質(zhì)
    固相萃取操作一般有三步：
    活化——除去柱子內(nèi)的雜質(zhì)并創(chuàng)造一定的溶劑環(huán)境。
    上樣——將樣品轉(zhuǎn)移入柱，此時(shí)大部分目標(biāo)化合物會隨樣品基液流出，雜質(zhì)被保留在柱上。故此步驟要開始收集。
    洗脫——用小體積的溶劑將組分淋洗下來并收集。合并收集液。
    此種情況多用于食品或農(nóng)殘分析中去除色素。


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