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技術(shù)文章

用比濁法測(cè)定大腸桿菌的生長(zhǎng)曲線

閱讀:111發(fā)布時(shí)間:2025-12-26

實(shí)驗(yàn)原理

將一定數(shù)量的細(xì)菌,接種于適宜的液體培養(yǎng)基中,在適溫下培養(yǎng),定時(shí)取樣測(cè)數(shù),以菌數(shù)的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo),生長(zhǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo),作出的曲線稱為生長(zhǎng)曲線。該曲線表明細(xì)菌在一定的環(huán)境條件下群體生長(zhǎng)與繁殖的規(guī)律。一般分為延緩期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期及衰亡期四個(gè)時(shí)期,各時(shí)期的長(zhǎng)短同菌種本身特征、培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)條件不同而異。

比濁法是根據(jù)細(xì)菌懸液細(xì)胞數(shù)與混濁度成正比,與透光度成反比關(guān)系,利用光電比色計(jì)測(cè)定細(xì)胞懸液的光密度(即OD值),用于表示該菌在本實(shí)驗(yàn)條件下的相對(duì)生長(zhǎng)量。

實(shí)驗(yàn)設(shè)正常生長(zhǎng)、加酸抑制和加富培養(yǎng)等三種處理,以了解細(xì)菌在不同生長(zhǎng)條件下的生長(zhǎng)情況。

實(shí)驗(yàn)試劑

牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基14支(每支10mL),濃縮5 倍的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基1支。無菌酸溶液(甲酸:乙酸:乳酸=3:1:1)。

實(shí)驗(yàn)設(shè)備

1mL無菌吸管、搖床、冰箱、光電比色計(jì)、標(biāo)簽等。

實(shí)驗(yàn)材料

大腸桿菌(E.coli)。

實(shí)驗(yàn)步驟(用比濁法測(cè)定大腸桿菌的生長(zhǎng)曲線)

方法1:

1. 接種:取13支裝有牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液的試管,貼上標(biāo)簽(注明菌名、培養(yǎng)處理、培養(yǎng)時(shí)間、組號(hào))。按無菌操作法用吸管向每管準(zhǔn)確加入0.2mL的大腸桿菌培養(yǎng)液,接種后,輕輕搖蕩,使菌體混勻。另一支不接種的培養(yǎng)管注明CK(對(duì)照)。

2. 培養(yǎng):將接種后的培養(yǎng)管置于搖床上,在37℃下振蕩培養(yǎng)。其中9支培養(yǎng)管分別于培養(yǎng)的0、1.5、3、4、6、8、10、12和14h后取山,放冰箱中貯存,待測(cè)定。加酸處理。取出經(jīng)4h培養(yǎng)的另二支培養(yǎng)管,按無菌操作法加入lmL無菌酸溶液,搖勻后放回?fù)u床上,繼續(xù)振蕩培養(yǎng),于培養(yǎng)8h和14h后取出放冰箱中貯存,待測(cè)定。加富營(yíng)養(yǎng)物處理。余下的二支培養(yǎng)管于培養(yǎng)6h后取出,按無菌操作法加入濃縮5倍的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液1mL,搖勻后,繼續(xù)進(jìn)行振蕩培養(yǎng),于培養(yǎng)8h和14h后取出,放入冰箱中貯存,待測(cè)定。

3. 比濁:將培養(yǎng)不同時(shí)間、形成不同細(xì)胞濃度的細(xì)菌培養(yǎng)液進(jìn)行適當(dāng)稀釋,使光密度值在0.0-0.4范圍內(nèi),以未接種的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基調(diào)零點(diǎn),在光電比色計(jì)上,選用400-440nm波長(zhǎng)的濾光片進(jìn)行比濁,從*稀濃度的菌懸液開始,依次測(cè)定。

方法2:

將大腸桿菌接入裝有牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液的小試管中(試管要能插入放比色杯的比色槽內(nèi))。37℃下振蕩培養(yǎng),分別在0、1.5 、3、4、6、8、10、12和14h取出,以未接種培養(yǎng)液調(diào)零點(diǎn),在光電比色計(jì)上比色。比色時(shí)應(yīng)自制一個(gè)暗盒將培養(yǎng)管和比色槽罩住,以形成一個(gè)暗室。

繪制曲線:

以細(xì)菌懸液的光密度值(OD)為縱坐標(biāo),培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo),給出大腸桿菌在正常生長(zhǎng)、加酸處理和加富培養(yǎng)三種條件下的生長(zhǎng)曲線。

如果我們將上述培養(yǎng)0,1.5,3,4,6,8,10,12,14h的細(xì)菌懸液用稀釋平板測(cè)數(shù)法進(jìn)行測(cè)數(shù),測(cè)出不同時(shí)間的含菌數(shù),以菌懸液比濁的光密度值為橫坐標(biāo),以細(xì)菌的數(shù)量為縱坐標(biāo),繪制一標(biāo)準(zhǔn)曲線,這樣在測(cè)得了任一培養(yǎng)時(shí)間的菌懸液光密度值后,就可以在此標(biāo)淮曲線上查出含菌數(shù)。這種方法已在工業(yè)上廣泛采用,它可以節(jié)省許多稀釋平板測(cè)數(shù)的時(shí)間,直接用比濁法測(cè)得的光密度值查標(biāo)準(zhǔn)曲線以了解各個(gè)培養(yǎng)時(shí)期的菌數(shù)消長(zhǎng)情況。


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