瓊脂糖凝膠電泳技術介紹
閱讀：279發(fā)布時間：2021-11-10
那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡單介紹一下關于瓊脂糖凝膠電泳技術介紹：
一、凝膠制備
1.微波爐溶解瓊脂糖時，膠液沸騰沖溢出三角錐瓶微波爐加熱時膠液可能發(fā)生劇烈沸騰，
1）總液體量不宜超過三角錐瓶的 50% 容量，
2）2% 以上膠液設置中火加熱
3）膠液劇烈沸騰時，停止加熱，移開三角錐瓶，請戴上防熱手套，小心搖動三角錐瓶，然后再次加熱，膠液沸騰直至膠液清澈，保證瓊脂糖*溶解。
2.瓊脂糖電泳圖像背景模糊不清
瓊脂糖沒有*溶解會造成電泳圖像背景模糊不清。 *溶解的瓊脂糖膠液清澈，三角錐瓶內(nèi)壁應沒有粘附瓊脂糖顆粒。
3.加熱后水分蒸發(fā)，如需要應加入熱的蒸餾水，補足到原來的重量，搖勻。
二、 電泳
1.DNA 條帶模糊，拖尾
1） DNA 降解。避免核酸酶污染。
2）DNA 上樣量過多。減少凝膠中 DNA 上樣量。
3） 電泳緩沖液陳舊: 電泳緩沖液多次使用后，離子強度降低， pH 值上升，緩沖能力減弱，從而影響電泳效果。建議經(jīng)常更換電泳緩沖液。
4）電泳條件不合適。電泳時電壓不應超過 20V/cm ，溫度＜30 ℃ ,巨大 DNA 鏈，溫度應＜15 ℃，核查所用電泳緩沖液是否有足夠的緩沖能力。
5）DNA 樣含鹽過高。泳前通過乙醇沉淀去除過多的鹽。
6）有蛋白污染。電泳前抽提去除蛋白。
7）DNA 變性。電泳前勿加熱，用 20mM NaCl 緩沖液稀釋 DNA 。
2.DNA 條帶淡弱或無 DNA 帶
1）DNA 的上樣量不夠：增加 DNA 的上樣量。
2）DNA 降解：避免 DNA 的核酸酶污染。
3）DNA 走出凝膠：縮短電泳時間，降低電壓，增強凝膠濃度。
4）分子大小相近的 DNA 帶不易分辨。增加電泳時間，使用正確的凝膠濃度。
5）DNA 變性：電泳前請勿高溫加熱 DNA 鏈，用 20mM NaCl Buffer稀釋DNA 。
6）DNA 鏈巨大，常規(guī)凝膠電泳不合適。在脈沖凝膠電泳上分析。
3.DNA MARKER 條帶扭曲
1）配制凝膠的緩沖液和電泳緩沖液不是同時配制的。使用同時配制的緩沖液。電泳時緩沖液高過液面1 － 2mm 即可。
2）電泳時電壓過高?？梢栽陔娪厩?nbsp;15 分鐘用較低電壓 (3V/cm), 等條帶出孔后，再調(diào)電壓。
3）盡量慢慢加樣 ,等樣品自然沉降后再加電壓。
以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結(jié)關于瓊脂糖凝膠電泳技術介紹。
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