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北京中顯恒業(yè)儀器儀表有限公司


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所在地區(qū):北京

聯(lián)系人:劉少坤

技術文章

什么是倒置熒光顯微鏡及其主要應用領域?

閱讀:115發(fā)布時間:2024-12-11

倒置顯微鏡具有在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內進行顯微觀察的特點,可以觀察不經(jīng)染色的透明活體 ; 落射熒光顯微適用于熒光顯微術。該儀器特別適用于對活體細胞和組織、流質、沉淀物等進行顯微研究,是生物學,細胞學,腫瘤學,遺傳學,免疫學等研究工作的理想儀器??晒┛蒲?、高校、醫(yī)療、防疫和農(nóng)牧等部門使用。倒置熒光顯微鏡是由倒置顯微鏡和落射熒光顯微鏡組成。儀器配有長工作距離平場消色差物鏡、大視野目鏡、雙目觀察,倒置顯微鏡還配有特長或超長工作距離聚光鏡,同時配有相襯裝置及長工作距離平場相襯物鏡。

倒置熒光顯微鏡是近代發(fā)展起來的新式熒光顯微鏡,特點是激發(fā)光從物鏡向下落射到標本表面,即用同一物鏡作為照明聚光器和收集熒光的物鏡。光路中需加上一個雙色束分離器,它與光鈾呈45。角,激發(fā)光被反射到物鏡中,并聚集在樣品上,樣品所產(chǎn)生的熒光以及由物鏡透鏡表面、蓋玻片表面反射的激發(fā)光同時進入物鏡,反回到雙色束分離器,使激發(fā)光和熒光分開,殘余激發(fā)光再被阻斷濾片吸收。如換用不同的激發(fā)濾片/雙色束分離器/阻斷濾片的組合插塊,可滿足不同熒光反應產(chǎn)物的需要。此種熒光顯微鏡的優(yōu)點是視野照明均勻,成像清晰,放大倍數(shù)愈大熒光愈強。

倒置熒光顯微鏡由熒光附件與倒置顯微鏡有機結合構成的,主要用于細胞等活體組織的熒光、相差觀察。 倒置顯微鏡(Inverted microscope)是為了適應生物學、醫(yī)學等領域中的組織培養(yǎng)、細胞離體培養(yǎng)、浮游生物、環(huán)境保護、食品檢驗等顯微觀察。由于這些活體被檢物體均放置在培養(yǎng)皿(或培養(yǎng)瓶)中,這樣就要求倒置顯微鏡的物鏡和聚光鏡的工作距離很長,能直接對培養(yǎng)皿中的被檢物體進行顯微觀察和研究。因此,物鏡、聚光鏡和光源的位置都顛倒過來,故稱為"倒置顯微鏡"。倒置顯微鏡多用于無色透明的活體觀察,在倒置顯微鏡的基礎上添加一套熒光附件:激光激發(fā)塊,熒光光源,熒光照明器,激發(fā)塊切換裝置,即可進行倒置熒光觀察。

  進口四顯微鏡都有相應的倒置熒光顯微鏡,如奧林巴斯的IX71倒置熒光顯微鏡,CKX41倒置熒光顯微鏡。國產(chǎn)品牌顯微鏡廠家近年隨著相差技術與熒光成像技術的不斷提升,也推出多款倒置熒光顯微鏡,中外合資企業(yè)澳浦光電DSY5000X倒置熒光顯微鏡就是一款,其熒光亮度高,且成像清晰,已經(jīng)達到或接近國外同類中檔顯微鏡的水準。

DSY5000X倒置生物顯微鏡

1. 光學系統(tǒng):UCIS無窮遠色差獨立校正光學系統(tǒng)

2. 機架:一體化結構,符合人體工程學原理,穩(wěn)定可靠,外觀國家

3. 觀察筒:雙目觀察筒,傾角45°,瞳孔距調節(jié)52-75mm,視度可調

4. 目鏡:WF10X/20mm平場大視野目鏡,高眼點,瞳孔觀察距離21mm

5. 物鏡:

10X無窮遠長距平場消色差物鏡NA0.25 WD9.67

20X無窮遠長距平場消色差物鏡NA0.40 WD7.97

40X無窮遠長距平場消色差物鏡NA0.60 WD3.76

20X無窮遠長距平場正相襯消色差物鏡NA0.40 WD7.97

6. 載物臺:固定式載物臺240mmX260mm;配低位同軸柔性XY向移動調節(jié)手輪,移動范圍135mmX85mm,配水滴載物片(Φ118)、多功能載物片(76 X 26、Φ60)。

7. 物鏡轉換器:五孔內定位轉換器,滾珠軸承內定位,有防霉裝置。

8. 粗微調:粗微調同軸,配有限位裝置和鎖緊裝置,低手位同軸調焦手輪,微調手輪格值0.001mm,調焦更加精確。

9. 聚光鏡:超長工作距離聚光鏡72mm,數(shù)值孔徑N.A0.30,配三孔相襯環(huán)板,配黃,綠,藍三種濾色片組。

10. 光源:采用內置式非球面透鏡,6V30WOsram鹵素燈,寬電壓110-240V,50/60Hz,配UOP專用電源箱。

11. 濾色片:藍濾色片組、綠濾色片組、黃濾色片組。

12. C接口:0.5XC接口

13. ISO9001、ISO14001認證、重慶市重點新產(chǎn)品證書。

14. 中外合資、國家企業(yè)。

熒光附件:落射熒光裝置、熒光燈箱、熒光電源箱、B、G、UV、V熒光激發(fā)濾色片

放大倍數(shù)

40X ~ 960X

目鏡

平場10x高眼點目鏡 視場20mm,瞳孔距離21mm,屈光度可調

物鏡

無窮遠長距平場物鏡 4X(選配)、10X、20X、40X、60X(選配)

無窮遠長距平場相襯物10X、20X、40X

觀察筒

鉸鏈式雙目,45°傾斜,瞳距52mm~75 mm,視度可調

鉸鏈式三目,45°傾斜,瞳距52mm~75 mm,視度可調

物鏡轉換器

內定位五孔轉換器

粗微調焦裝置

低位粗微同軸調焦手輪;微動手輪0.1mm/轉,格值0.001mm;粗動松緊可調;工作臺上限位裝置。

載物臺

固定式載物臺240mmX260mm;配低位同軸柔性XY向移動調節(jié)手輪,移動范圍135mmX85mm

聚光鏡

N.A.0.70 WD120mm

相襯環(huán)板

10X、20X、40X

C接口

0.5X、1X

什么是倒置熒光顯微鏡及其主要應用領域?

一、熒光顯微鏡標本制作要求
1.載玻片
載玻片厚度應在0.8~1.2mm之間,太厚的坡片,一方面光吸收多,另一方面不能使激發(fā)光在標本上聚集。載玻片必須光潔,厚度均勻,無明顯自發(fā)熒光。有時需用石英玻璃載玻片。
2.蓋玻片
蓋玻片厚度在0.17mm左右,光潔。為了加強激發(fā)光,也可用干澀蓋玻片,這是一種特制的表面鍍有若干層對不同波長的光起不同干涉作用的物質(如氟化鎂)的蓋玻片,它可以使熒光順利通過,而反射激發(fā)光,這種反射的激發(fā)光可激發(fā)標本。
3.標本
組織切片或其他標本不能太厚,如太厚激發(fā)光大部分消耗在標本下部,而物鏡直接觀察到的上部不能被充分激發(fā)。另外,細胞重疊或雜質掩蓋,影響判斷。
4.封裱劑
封裱劑常用甘油,必須無自發(fā)熒光,無色透明,熒光的亮度在PH8.5~9.5時較亮,不易很快褪去。所以,常用甘油和0.5mol/L PH9.0~9.5的碳酸鹽緩沖液的等量混合液作封裱劑。
5.鏡油
一般用暗視野熒光顯微鏡和油鏡觀察標本時,必須使用鏡油。使用特制的無熒光鏡油,也可用上述甘油代替,液體石蠟也可用,只是折光率較低,對圖像質量略有影響。
二、熒光顯微鏡基本操作
1.關閉房間內的電燈,開啟顯微鏡汞燈;
2.根據(jù)樣品標記的熒光素選擇相應的濾光片;
3.放好樣品,找到合適的視野;
4.如需拍照,請確認照相機內已裝好彩色膠卷(使用27定膠卷);
5.開啟自拍裝置,選擇手動檔,通常拍攝速度在0.5-10秒內;
6.使用結束,關閉所有電源并做好使用記錄。
三、熒光圖像的記錄方法
熒光顯微鏡所看到的熒光圖像,一是具有形態(tài)學特征,二是具有熒光的顏色和亮度,在判斷結果時,必須將二者結合起來綜合判斷。結果記錄根據(jù)主觀指標,即憑工作者目力觀察。作為一般定性觀察,基本上可靠的。隨著技術科學的發(fā)展,在不同程度上采用客觀指標記錄判斷結果,如用細胞分光光度計,圖像分析儀等儀器。但這些儀器記錄的結果,也必須結合主觀的判斷。
熒光顯微鏡攝影技術對于記錄熒光圖像十分必要,由于熒光很易褪色減弱,要即時攝影記錄結果。方法與普通顯微攝影技術基本相同。只是需要采用高速感光膠片即可。因紫外光對熒光猝滅作用大,如FITC的標記物,在紫外光下照射30s,熒光亮度降低50%。所以,曝光速度太慢,就不能將熒光圖像拍攝下來。一般研究型熒光顯微鏡都有半自動或全自動顯微攝影系統(tǒng)裝置。
四、使用熒光顯微鏡的注意事項
1.嚴格按照熒光顯微鏡出廠說明書要求進行操作,不要隨意改變程序。
2.應在暗室中進行檢查。進入暗室后,接上電源,點燃超高壓汞燈5~15min,待光源發(fā)出強光穩(wěn)定后,眼睛適應暗室,再開始觀察標本。
3.防止紫外線對眼睛的損害,在調整光源時應戴上防護眼鏡。
4.檢查時間每次以1~2h為宜,超過90min,超高壓汞燈發(fā)光強度逐漸下降,熒光減弱;標本受紫外線照射3~5min后,熒光也明顯減弱;所以,最多不得超過2~3h。
5.熒光顯微鏡光源壽命有限,標本應集中檢查,以節(jié)省時間,保護光源。天熱時,應加電扇散熱降溫,新?lián)Q燈泡應從開始就記錄使用時間。燈熄滅后欲再用時,須待燈泡充分冷卻后才能點燃。一天中應避免數(shù)次點燃光源。
6.標本染色后立即觀察,因時間久了熒光會逐漸減弱。若將標本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存,可延緩熒光減弱時間,防止封裱劑蒸發(fā)。
7.熒光亮度的判斷標準:一般分為四級,即“-”指無或可見微弱熒光。“+”指僅能見明確可見的熒光。“++”指可見有明亮的熒光。“+++”指可見耀眼的熒光。




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