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[ELISA實(shí)驗(yàn)必看]如何設(shè)定實(shí)驗(yàn)中的陰性、陽性和空白對照

時(shí)間:2014/8/1閱讀:8995
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用稀釋液代替檢測樣本、用以觀測zui終反應(yīng)的顯色“本底”、并用于酶標(biāo)儀消除、扣除“本底”,即:以本底為“零”讀取陽性、陰性對照孔和樣本檢測孔的吸光值(A);或者,在計(jì)算陰性對照均值(NCx)、陽性對照均值(PCx)、樣本讀數(shù)的S/C.O.值時(shí)減去空白對照的本底吸光值。

陰性對照,應(yīng)當(dāng)是本項(xiàng)檢測試驗(yàn)中采用與待撿物具有同源性和同質(zhì)性,又不含有待檢物質(zhì),并能客觀比較和鑒別處理因素(血清免疫學(xué)試驗(yàn)中有特異性抗原與抗體反應(yīng))之間的差異?!£幮詫φ盏幕窘M成也應(yīng)該盡量與檢測樣本的組成一致,先行檢測確定其中不含待檢物質(zhì)。比如,檢測人血清標(biāo)本時(shí),陰性陽性對照同陰性對照,只是采用“精選”的含有待檢物質(zhì)的人血清制備而成。所謂“精選”,就是把收集的陽性人血清經(jīng)過數(shù)種試驗(yàn)進(jìn)行“篩試”、把含有“干擾性物質(zhì)”的血清剔除、不用,以避免出現(xiàn)“假陽性”干擾試驗(yàn)結(jié)果。   

陽性對照的基本組成應(yīng)該盡量與檢測樣本的組成一致,一般陽性對照多以含蛋白保護(hù)劑的緩沖液為基質(zhì),加入一定量的待檢物質(zhì)。比如,以人血清為標(biāo)本的測定,陽性對照多用確定的病人血清或者以復(fù)鈣人血漿為原料加入一定量標(biāo)準(zhǔn)品。

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