高效液相色譜中常用的柱前衍生化方法
紫外衍生化反應(yīng)
液相色譜使用最多的是紫外檢測器，為了使一些沒有紫外吸收或紫外吸收很弱的化合物能被紫外檢測器檢測，往往通過衍生化反應(yīng)在這些化合物的分子中引入有強紫外吸收的基團：2,、苯甲基、對硝基苯甲基、3,5-*甲基、苯甲酸酯、對甲苯酰、對氯苯甲酸制、對硝基苯甲酸酯、對甲氧基苯甲酸酯、苯甲酰甲基、對溴苯甲酰甲基，這些衍生物可被紫外檢測器檢測。
大多數(shù)紫外衍生反應(yīng)來自經(jīng)典的光度分析和有機定量分析，新的衍生化反應(yīng)和衍生化試劑是隨液相發(fā)展而發(fā)展的，這些反應(yīng)的原理都來自有機合成，所以就要求操作者對有機合成有所了解。但是，由于柱前衍生化是為色譜分析準(zhǔn)備樣品，處理樣品的量?。╩g級），所用的小型和微型反應(yīng)器皿又不同于常量的有機合成，而是類似于近年來發(fā)展的微量有機合成。紫外衍生化反應(yīng)要選擇反應(yīng)產(chǎn)率高、重復(fù)性好的反應(yīng)。過量試劑和試劑中的雜質(zhì)如果干擾下一步的色譜分離和檢測，則在色譜進樣前要進行純化分離。還要注意反應(yīng)介質(zhì)對紫外吸收的影響。
（1）苯甲?；磻?yīng)：苯甲酰氯及其衍生物--對硝基苯甲酰氯、3,5-二甲酰氯和對甲氧基苯甲酰氯都可以同胺、醇和酚類化合物反應(yīng)，生成紫外吸收的苯甲酸酯類衍生物；
（2）2,4-二硝基氟代苯（DNFB）的反應(yīng)：DNFB與醇的反應(yīng)產(chǎn)率很低，但可與大多數(shù)伯胺、仲胺和氨基酸反應(yīng)，生成強紫外吸收的*類衍生物；
（3）苯基異硫氰酸酯（PITC）的反應(yīng)：PITC可與氨基酸反應(yīng)，生成苯基己丙酰硫脲衍生物--PTH氨基酸；
（4）苯基磺酰氯的反應(yīng)：苯基磺酰氯可與伯胺和仲胺反應(yīng)。
甲苯磺酰氯可與多氨基化合物反應(yīng)，不僅能提高它們的檢測靈敏度，還可改變HPLC的分離度。
（5）有機酸的酯化反應(yīng)：有機酸很容易與酰溴基反應(yīng)生成酯，常用的酰溴基試劑有苯甲酰溴、甲氧基苯甲酰溴、對溴基苯甲酰溴和對硝基苯甲酰溴等；
酯化反應(yīng)在極性溶劑（如乙腈、丙酮或*）中進行，有時需要加催化劑，如冠醚加鉀離子、二乙胺或N-二異丙基胺等。
（6）羰羥基化合物的反應(yīng)：醛類和酮類中的羰基可與2,肼（DNPA）反應(yīng)，反應(yīng)在弱酸性條件下進行，生成苯腙衍生物。
羰基化合物還可以與對羥胺（PNBA）在堿催化下反應(yīng)，生成有強紫外吸收的肟。