兩蟲(chóng)“EPA1623方法" 是由美國(guó)國(guó)家制定的用于測(cè)定水中隱孢子蟲(chóng)和賈第鞭毛蟲(chóng)的標(biāo)準(zhǔn)方法。概括地說(shuō)，該方法分為三部。一對(duì)水樣進(jìn)行過(guò)濾收集水中的卵囊和孢囊;第二，利用免疫磁分離來(lái)純化過(guò)濾樣品;第三，對(duì)純化的樣品通過(guò)免疫熒光顯微鏡法來(lái)檢測(cè)“兩蟲(chóng)"的數(shù)量。

1. 水樣過(guò)濾:采用美國(guó)EPA推薦的PALL公司E nvirochek-HV囊式濾器對(duì)水樣進(jìn)行過(guò)濾，將卵囊、孢囊及其他物質(zhì)收集在過(guò)濾器上。該過(guò)濾器可用于實(shí)驗(yàn)室批量水樣的過(guò)濾，也可以用于野外現(xiàn)場(chǎng)水樣的過(guò)濾。過(guò)濾后的囊式濾器，用洗脫劑將攔截在濾囊上的顆粒物質(zhì)震蕩洗脫下來(lái)，并將洗脫物收集在一個(gè)250毫升的離心管中。

   
   

2.免疫磁分離:離心管中的洗脫物通過(guò)離心分離作用，使顆粒物沉淀在離心管底部，同時(shí)去掉離心管中的上清液。將離心后含有卵囊和孢囊的沉淀物用純水混勻，并向其中加入Dynal公司的免疫磁分離試劑(Dynabeads GC- Combo試劑盒)進(jìn)行磁分離。具體做法是:首先用帶有抗體(抗隱孢子蟲(chóng)和抗賈第鞭毛蟲(chóng))的特殊磁珠捕獲沉淀物中的卵囊和孢囊;其次通過(guò)Dyna1公司的MPC-1、MPC-S磁粒濃縮器將捕獲有卵囊和孢囊的磁珠吸附在試管壁.上，去掉未被吸附在試管壁上含雜質(zhì)的液體，以達(dá)到卵囊和孢囊從沉淀物中分離出來(lái)的目的;再次加入鹽酸將管壁上捕獲有卵囊和孢囊的磁珠進(jìn)行洗滌，以使卵囊和孢囊從磁珠上解離出來(lái);最后將含有卵囊和孢囊的純化液轉(zhuǎn)移至并形載玻片上進(jìn)行制片。

3.IFA染色&鏡檢:待井形載玻片的純化液干后，用Na0H中和井形載玻片上樣品，再用Dyna 1公司的Aqua -G loTMG/C染色試劑盒，將卵囊和孢囊在井形載玻片上用磁熒光標(biāo)記的單性抗體和DAPI溶液著色后，蓋上蓋玻片。然后0LYMPUS熒光和差分干涉相襯(DIC)顯微鏡對(duì)著色樣本進(jìn)行檢測(cè)。觀察樣片，對(duì)符合卵囊和孢囊大小、外形、熒光特性的對(duì)象進(jìn)行定性、定量分析。