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兩蟲(chóng)檢測(cè)系統(tǒng)概述1.采樣淘洗濃縮系統(tǒng)采用符合中國(guó)國(guó)標(biāo)及美國(guó)EPA要求的囊式過(guò)濾器對(duì)水樣進(jìn)行 過(guò)濾,將孢囊、卵囊及其他物質(zhì)收集在過(guò)濾器上,該過(guò)濾器可用于實(shí)驗(yàn)室及野外現(xiàn)場(chǎng)水樣過(guò)濾。濾囊利用兩蟲(chóng)淘洗緩沖液將攔截在濾囊上的 兩蟲(chóng)振蕩洗脫下來(lái),后進(jìn)行離心收集。2. 免疫磁分離系統(tǒng)(IMS)IMS過(guò)程使用美國(guó)UniBest優(yōu)佰達(dá)公司的ClearScan系列兩蟲(chóng)免疫磁分離試劑盒, 利用帶有特異性抗體的磁珠與樣品中的賈第鞭毛蟲(chóng)和隱孢子蟲(chóng)特異性抗原相結(jié)合,在磁場(chǎng)中高效選擇性分離,該步驟可保證檢測(cè)的特異性。

3.IFA(間接免疫熒光)染色系統(tǒng)3.使用美國(guó)UniBest優(yōu)佰達(dá)公司的Cellabs型檢測(cè)賈第鞭毛蟲(chóng)和隱孢子蟲(chóng)診斷試劑 盒(內(nèi)含*的免疫球蛋白M五聚體FITC單克隆抗體)對(duì)水樣中的兩蟲(chóng)(抗原)進(jìn)行熒光標(biāo)記,同時(shí)利用細(xì)胞核染色劑DAPI(4,6-二脒基-2-苯基 吲哚)與細(xì)胞核中的雙鏈DNA結(jié)合發(fā)出熒光,排除假陽(yáng)性反應(yīng),從而提高鏡檢準(zhǔn)確性。顯微鏡檢系統(tǒng)使用兩蟲(chóng)高級(jí)熒光顯微鏡對(duì)著色樣本進(jìn)行檢測(cè),觀察樣本,對(duì)符合孢囊和卵囊大小 、外形、熒光特性的被觀察物依據(jù)國(guó)標(biāo)GB/T 5750.12-2006中賈第鞭毛蟲(chóng)孢囊與隱孢子蟲(chóng)卵囊的特征(見(jiàn)尾頁(yè))進(jìn)行定性、定量分析。
兩蟲(chóng)檢測(cè)方法主要有:熒光免疫分析法(1623 法)、酶聯(lián)免疫法、PCR法。雖然PCR法及酶聯(lián)免疫法的敏感性都比1623法好,但PCR法以及酶聯(lián)免疫法所需的試劑比較昂貴、成本高、檢測(cè)周期較長(zhǎng),且操作較為復(fù)雜,對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的技術(shù)要求較強(qiáng)。目前,對(duì)水中隱孢子蟲(chóng)和賈第鞭毛蟲(chóng)的檢測(cè)方法是美國(guó)BPA制定的1623法。“EPA1623方法"是由美國(guó)國(guó)家制定的用于測(cè)定水中隱孢子蟲(chóng)和賈第鞭毛蟲(chóng)的標(biāo)準(zhǔn)方法。概括地說(shuō),該方法分為三部。對(duì)水樣進(jìn)行過(guò)濾,收集水中的卵囊和孢囊;第二,利用免疫磁分離來(lái)純化過(guò)濾樣品;第三,對(duì)純化的樣品通過(guò)免疫熒光顯微鏡法來(lái)檢測(cè)“兩蟲(chóng)的數(shù)量。
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