本研究通過使用商業(yè)化模塊化方法（即 ML Eazy）以及一次性盒式裝置的自動(dòng)化系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)了符合質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)量保證要求的¹⁷⁷Lu-FAPI 放射性藥物的全自動(dòng)合成。

¹⁷⁷Lu-FAPI-04 &¹⁷⁷Lu-FAPI-46 初步研究

為了確定合成¹⁷⁷Lu-FAPI衍生物的最佳條件，開展了一系列人工放射性標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。所有實(shí)驗(yàn)的pH 值為 4.5，由抗壞血酸緩沖體系配制而成（凍干試劑盒中含 50 毫克抗壞血酸和 7.9 毫克NaOH，溶解于 1 毫升超純水中）。這是前期經(jīng)驗(yàn)獲得的¹⁷⁷Lu與 DOTA 螯合劑絡(luò)合反應(yīng)的最適宜條件。反應(yīng)溫度保持在 95°C 恒定不變。

通過改變肽的用量和反應(yīng)時(shí)間參數(shù)，嘗試優(yōu)化放射化學(xué)產(chǎn)率和放射化學(xué)純度。

經(jīng)過研究，確定了 FAPI-04（表 1，第 4、5 項(xiàng)）和 FAPI-46（表 2，第 4、5 項(xiàng)）的最佳合成參數(shù)為：肽的用量為1mCi /μg，反應(yīng)時(shí)間為 95°C 下 20 分鐘。

自動(dòng)化合成裝置及合成方法

將確定的¹⁷⁷Lu-FAPI衍生物的最佳合成參數(shù)直接被輸入到ML-Eazy合成設(shè)備中（表1和2，第4、5項(xiàng)）。此外，還使用了Eckert & Ziegler為常規(guī)¹⁷⁷Lu標(biāo)記肽的合成預(yù)先設(shè)計(jì)的可重復(fù)使用的盒式套裝。

1.將凍干的抗壞血酸緩沖液（50 毫克抗壞血酸 + 7.9 毫克NaOH）溶解在 1.0 毫升無菌超純水中（pH 值為 4.5）。

2.加入 100 ug/uL的FAPI- 04 或 FAPI-46 后，將其轉(zhuǎn)移至盒式裝置中的小瓶（圖 3 b）中。

3.向鹽水小瓶中加入 20 毫升生理鹽水，并將其連接到盒式裝置中的相應(yīng)位置（圖 3 d）。

4.用 10 毫升無菌超純水對(duì)CM 小瓶進(jìn)行預(yù)處理，并將其與滅菌過濾器一起連接到最終產(chǎn)品輸送管線上。

5.將最終產(chǎn)品小瓶（圖 3e）連接到最終產(chǎn)品輸送管線的末端。

6.將合成組件組裝到合成裝置上。

7.將 100 mCi ¹⁷⁷Lu（在 100 uL 0.04 M鹽酸中）連接到組件上的相應(yīng)位置（圖 3a）。

8.啟動(dòng)合成工作站，并在合成完成后，獲得了最終產(chǎn)物 ¹⁷⁷Lu-API-04 和 ¹⁷⁷Lu-FAPI-46，其放射化學(xué)產(chǎn)率分別為 88%±3 和 86%±3（表 3）。

表 4 總結(jié)了放射性標(biāo)記過程后的結(jié)果。放射化學(xué)產(chǎn)率約為 85%至 90%，絕對(duì)放射化學(xué)純度為99%。

¹⁷⁷Lu-FAPI-04&¹⁷⁷Lu-FAPI-46 在最終制劑中的穩(wěn)定性

對(duì)¹⁷⁷Lu-FAPI衍生物的穩(wěn)定性進(jìn)行了為期 4 天的監(jiān)測(cè)，從合成結(jié)束時(shí)開始（T0），在室溫 24°C 條件下進(jìn)行（圖 6 和圖 7）。通過 R-HPLC 和 R-TLC 方法進(jìn)行了放射化學(xué)純度分析。

¹⁷⁷Lu-FAPI-04&¹⁷⁷Lu-FAPI-46 在最人血漿中的穩(wěn)定性

將 1 mCi的最終產(chǎn)物與1 毫升人體血清混合，并在 37°C 的條件下進(jìn)行孵育。對(duì)這些混合物的穩(wěn)定性進(jìn)行了為期 4 天的監(jiān)測(cè)（見圖 8）。通過R-HPLC 和 R-TLC 方法進(jìn)行了放射化學(xué)純度分析。

穩(wěn)定性研究表明，¹⁷⁷Lu-FAPI-04&¹⁷⁷Lu-FAPI-46在室溫下制劑中以及人血清中都具有很高的穩(wěn)定性，可達(dá) 4 天。

綜上，本研究成功實(shí)現(xiàn)了¹⁷⁷Lu-FAPI 衍生物的全自動(dòng)合成。這種自動(dòng)化合成提供了完整的放射性標(biāo)記過程，具有高產(chǎn)率、高重現(xiàn)性以及超過 99%的放射化學(xué)純度。所有合成步驟均在合成模板中完成，無需任何人工干預(yù)。使用一次性套盒來防止交叉污染和輻射暴露。詳細(xì)的質(zhì)量控制和穩(wěn)定性研究得到了充分展示，所有最終產(chǎn)品的規(guī)格均在規(guī)定的范圍和可接受標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)獲得