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黃曲霉毒素B1的快速檢測方法及其重要性

閱讀:4發(fā)布時間:2026-6-20

黃曲霉毒素,英文縮寫AFT,是二呋喃環(huán)和(氧雜萘)組成的化合物,由黃曲霉、寄生曲霉等菌株產(chǎn)生,分子量為312~346,熔點為200~300℃,具有穩(wěn)定、耐高溫特性,可于長波紫外光下產(chǎn)生熒光,根據(jù)熒光顏色、RF值及結構不同等分為B1、B2、G1、G2、M1、M2、P1、R1、GM、毒醇。

AFT難溶于水、乙烷、和石油醚,易溶于甲醇、乙醇、氯仿、乙腈和二甲基甲酰胺等有機溶劑。AFT可在PH1~3的酸性溶劑中稍分解,PH9~10溶液中迅速分解破壞,遇堿可迅速分解,在PH9~10堿性溶液中可分解為幾乎無毒的鹽,可在酸性條件下還原。

實驗目的

是泛指一些由真菌產(chǎn)生的強毒性致癌類物質,短期攝入高劑量(1㎎/kg體重)可導致急性中毒,常見發(fā)熱、嘔吐、黃疸等肝功能異常癥狀或肝壞死,長期低劑量(20微克/千克體重)暴露會顯著增加肝癌、胃癌等患病風險,因其廣泛存在于農(nóng)作物與食物中,并對人體和動物危害巨大,故而建立快速、準確的檢測方法對保障食品安全與公共健康具有重要意義。

本實驗旨在通過固相酶聯(lián)免疫吸附ELISA的原理,即酶聯(lián)免疫法,、定量測定樣品中黃曲霉毒素B1的含量,為食品污染風險評估提供科學依據(jù)。

實驗儀器

①ST-2000A  霉菌毒素測定儀

②玉米、均質器、氮氣吹干裝置、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01g)、微量移液器、甲醇、正己烷、或二氯甲烷試劑

實驗步驟

①檢查實驗所用器材,確保其干凈干燥無污染

②甲醇、去離子水以7:3比例配取樣品提取液

③取粉碎玉米樣品2g,放于50ml離心管,加5ml樣品提取液,振蕩5分鐘,室溫4000轉/分離心10分鐘,結束后取0.5ml上清,加入0.5ml去離子水,混勻

④將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min,搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,并用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液。

⑤將樣本和標準品對應微孔按序編號,每個樣本和標準品做2孔平行,并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。加標準品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶標記物50µl/孔,再加入50µl/孔的抗體工作液,用蓋板膜封板,輕輕振蕩5秒混勻,25℃反應30分鐘。

⑥揭開蓋板膜,將孔內(nèi)液體甩干,用工作洗滌液250µl/孔充分洗滌5次,每次間隔30秒,用吸水紙拍干

⑦每孔加入底物液A(50µl),再加底物液B(50µl),振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15分鐘。

⑧每孔加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,終止反應。

⑨用測定儀于450nm處測定每孔吸光度值(建議用雙波長450/630nm)。測定應在終止反應后10分鐘內(nèi)完成

⑩儀器完成測定,自動給出結果

實驗結果

經(jīng)檢測,該樣品的黃曲霉毒素約為0.19ug/kg,滿足GB 2761-2017《食品安全國家標準 食品中真菌毒素》標準。



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