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上海金鵬分析儀器有限公司

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技術(shù)文章

凝膠電泳法檢測內(nèi)毒素

閱讀：12發(fā)布時間：2026-6-6

那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡單介紹一下關(guān)于凝膠電泳法檢測內(nèi)**:
凝膠電泳法
當(dāng)將含有內(nèi)**的溶液與裂解物混合后進(jìn)行孵育時，方法A和B取決于牢固凝膠的形成。方法A作為極限測試進(jìn)行，其中受檢制劑的兩種重復(fù)溶液中所含的內(nèi)**的濃度均應(yīng)低于各論中規(guī)定的內(nèi)**極限濃度。方法B半定量測定所檢查制劑中的內(nèi)**濃度

裂解液的敏感性
在測試中使用每批裂解物至少一個小瓶之前，請確認(rèn)每批新裂解物的標(biāo)記靈敏度。準(zhǔn)備一系列的CSE稀釋液，使?jié)舛确謩e為2λ，λ，0.5λ和0.25λ，其中λ是裂解液在EU中每毫升的標(biāo)記靈敏度。對這四個標(biāo)準(zhǔn)濃度一式兩份，按照方法給出的方法進(jìn)行測試，并包括由水BET組成的陰性對照。至少每個系列中的**終稀釋液**給出陰性結(jié)果。
計算在發(fā)現(xiàn)陽性結(jié)果的每個稀釋系列中**低內(nèi)**濃度的對數(shù)平均值。幾何平均終點濃度是裂解液的測量靈敏度，以ED / ml為單位，可使用以下表達(dá)式計算：

幾何平均終點濃度=反對數(shù)（∑e / f）
其中，∑e =對數(shù)之和使用的一系列稀釋液的終點濃度
f =復(fù)制試管的數(shù)量。
該平均值給出了估計的裂解物敏感性，**在0.5λ和2λ之間。
測試干擾因素
應(yīng)牢記某些因素干擾內(nèi)**測試的可能性。為了驗證測試結(jié)果，**證明測試制劑不會抑制或增強反應(yīng)或以其他方式干擾測試。的驗證如果裂解物的供應(yīng)商或制造或樣品的制劑的方法改變**被重復(fù)。
用水BET稀釋測試制劑是克服抑制作用的**簡單方法。

允許的稀釋水平或**大有效稀釋度（MVD）取決于產(chǎn)品的濃度，產(chǎn)品的內(nèi)**極限和裂解物的敏感性。它由以下表達(dá)式計算：

MVD =內(nèi)**極限x測試溶液的濃度
λ
準(zhǔn)備測試溶液。如表中所示準(zhǔn)備溶液A到D的重復(fù)樣品。

溶液A =稀釋度等于或低于MVD的產(chǎn)品溶液（測試溶液）。
溶液B =加標(biāo)有指定CSE濃度的測試溶液（正產(chǎn)品控制； PPC）。
溶液C =在水BET中具有指示的CSE濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。
溶液D =水BET（陰性對照； NC）。
方法
在試管，小瓶或微量滴定板孔等容器中執(zhí)行以下步驟。在每個選定的容器中，添加適量的陰性對照（NC），水BET中的標(biāo)準(zhǔn)CSE溶液，測試溶液和陽性產(chǎn)品對照（PPC）。除非使用單個測試瓶，否則應(yīng)間隔一定時間以允許讀取每個結(jié)果，向每個容器中添加等體積的適當(dāng)構(gòu)成的裂解液。輕輕地混合樣品裂解物混合物，然后放置在諸如水浴或加熱塊的培養(yǎng)裝置中，準(zhǔn)確記錄放置容器的時間。將每個容器在不受干擾的37°±10孵育60±2分鐘。取下容器并仔細(xì)檢查內(nèi)容物。
將此結(jié)果記錄為正（+）。陰性結(jié)果的特征是不存在這種凝膠或形成不保持其完整性的粘性凝膠。將這樣的結(jié)果記錄為負(fù)（-）。小心處理容器，避免使它們遭受不必要的振動，因為可能導(dǎo)致錯誤的負(fù)面觀察。

通過使用在裂解物敏感性下描述的公式，計算C帶系列溶液的幾何平均終點濃度。
計算和結(jié)果解釋
如果
（a）系列A和D的解決方案給出否定的結(jié)果，則干擾因素的檢驗是有效的；
（b）用C系列溶液獲得的結(jié)果證實了裂解物的標(biāo)記靈敏度；
（c）B系列溶液終點濃度的幾何平均值不大于21或不小于0.51。

如果獲得的結(jié)果超出規(guī)定的范圍，則所檢測的測試制劑將充當(dāng)抑制劑或活化劑?？梢酝ㄟ^進(jìn)一步稀釋（不超過MVD），過濾，中和，滅活或通過去除干擾物質(zhì)來消除干擾因素。使用更敏感的裂解液可以對所檢查的制劑進(jìn)行更大的稀釋。如果干擾因素通過標(biāo)稱分離極限的分子量對應(yīng)于10,000到20,000的過濾器，例如三乙酸纖維素的不對稱膜過濾器，則可以使用超濾。
應(yīng)該檢查這種過濾器是否存在任何導(dǎo)致假陽性結(jié)果的因素。用水BET或pH 7.4 BET的三氯化物緩沖液沖洗保留在過濾器上的含有內(nèi)**的物質(zhì)。內(nèi)**在水BET或緩沖液中回收。確定每種待測制劑的測試體積和**終體積中的內(nèi)**濃度。
通過使用添加了CSE并已提交給所選方法的待測制劑，通過重復(fù)進(jìn)行干擾因子測試，確定所選方法可有效消除干擾，而不會去除內(nèi)**。
以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于凝膠電泳法檢測內(nèi)**。

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上海金鵬分析儀器有限公司

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