BOD5的測(cè)定通常采用標(biāo)準(zhǔn)稀釋接種法（HJ 505-2009）。其操作為，經(jīng)中和及除去毒性物質(zhì)并經(jīng)稀釋后的水樣（必要時(shí)加入適量含好氧微生物的接種液）置入培養(yǎng)瓶中，20℃避光培養(yǎng)5天，通過測(cè)定培養(yǎng)前后水樣中溶解氧的含量，計(jì)算出5天內(nèi)的耗氧量，再根據(jù)稀釋倍數(shù)得到BOD5。
BOD5的測(cè)定是生物和化學(xué)作用的共同結(jié)果，必須嚴(yán)格按照操作規(guī)范進(jìn)行。改變?nèi)魏我粋€(gè)條件都會(huì)影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性和可比性。影響B(tài)OD5測(cè)定的條件包括pH值、溫度、微生物種類和數(shù)量、無機(jī)鹽含量、溶解氧和稀釋倍數(shù)等。
用于檢測(cè)BOD5的水樣必須裝滿并密封在取樣瓶中，并儲(chǔ)存在2至5°C的冰箱中直至分析。一般應(yīng)在取樣后6小時(shí)內(nèi)進(jìn)行檢驗(yàn)。在任何情況下，水樣的保存時(shí)間都不應(yīng)超過 24 小時(shí)。
在測(cè)量工業(yè)廢水的BOD5時(shí)，由于工業(yè)廢水通常含有較少的溶解氧，且大部分成分是可生物降解的有機(jī)物質(zhì)，為了保持培養(yǎng)瓶中的好氧狀態(tài)，必須對(duì)水樣進(jìn)行稀釋（或接種稀釋），這個(gè)操作是標(biāo)準(zhǔn)稀釋法的比較大的特點(diǎn)。為保證測(cè)量結(jié)果的可靠性，稀釋水樣培養(yǎng)5天后耗氧量必須大于2mg/L，殘留溶解氧必須大于1mg/L。
放入接種液的目的是保證一定量的微生物降解水中的有機(jī)物，接種液的量以使5天耗氧0.1mg/L以下為佳。使用金屬蒸餾器制備的蒸餾水作為稀釋水時(shí)，應(yīng)注意檢查其中金屬離子的含量，以免抑制微生物的繁殖和新陳代謝。為保證稀釋水中的溶解氧接近飽和，必要時(shí)可通入凈化空氣或純氧，然后置于20℃培養(yǎng)箱中一定時(shí)間，以使與空氣中氧分壓達(dá)到平衡。
稀釋倍數(shù)的確定以培養(yǎng)第5天耗氧量大于2mg/L，剩余溶解氧大于1mg/L為原則。稀釋系數(shù)太大或太小都會(huì)導(dǎo)致測(cè)試失敗。而且由于BOD5的分析周期較長(zhǎng)，一旦出現(xiàn)類似情況，也無法原封不動(dòng)地補(bǔ)充。測(cè)量某工業(yè)廢水的BOD5時(shí)，可先測(cè)量其CODCr，然后參考現(xiàn)有水質(zhì)相近廢水的相關(guān)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)，初步確定待測(cè)水樣的BOD5/CODCr值，然后計(jì)算BOD5的大致范圍，并確定稀釋系數(shù)。
對(duì)于含有抑制或殺滅好氧微生物代謝活動(dòng)物質(zhì)的水樣，用普通方法直接測(cè)定BOD5的結(jié)果會(huì)與實(shí)際值有偏差，測(cè)定前必須進(jìn)行相應(yīng)的預(yù)處理。這些影響B(tài)OD5測(cè)定的物質(zhì)和因素包括重金屬等有毒無機(jī)或有機(jī)物質(zhì)、余氯等氧化性物質(zhì)，pH值過高或過低等。
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