稀釋水的質(zhì)量對 BOD5 測量的準確性具有重要意義。因此，稀釋水空白的5天耗氧量必須小于0.2 mg/L，小于0.1 mg/L是比較好的。接種稀釋水應(yīng)在0.3～1.0mg/L之間。
保證稀釋水水質(zhì)的關(guān)鍵是控制有機物含量比較低，抑制微生物繁殖的物質(zhì)含量比較低。 因此，使用蒸餾水作為稀釋水比較好。 用離子交換樹脂制成的純水不適合作為稀釋水，因為去離子水往往含有從樹脂中分離出來的有機物。
如果用于制備蒸餾水的自來水中含有某些揮發(fā)性有機化合物，為了防止它們殘留在蒸餾水中，蒸餾前應(yīng)進行去除有機化合物的預(yù)處理。 用金屬蒸餾器制成的蒸餾水應(yīng)注意檢查其中金屬離子的含量。
如果使用的稀釋水因存在有機物而達不到要求，可加入適量曝氣池接種物，在室溫或20℃下保存一定時間予以消除。接種量以5天耗氧量0.1mg/L為原則。為防止藻類大量繁殖，必須在暗室中進行儲存。如果儲存后的稀釋水中有沉淀物，僅使用上清液過濾除去沉淀。
為保證稀釋水中的溶解氧接近飽和，必要時可用真空泵或噴水器吸入凈化空氣，或用微型空壓機注入凈化空氣， 氧氣瓶可用于注入純氧，然后充氧。將稀釋后的水置于20℃培養(yǎng)箱中一定時間，使溶解氧達到平衡。冬季放置在較低室溫的稀釋水可能含有過多的溶解氧，而在炎熱的夏季則相反。因此，當(dāng)室溫與20℃相差較大時，必須在培養(yǎng)箱中放置一段時間，使其與培養(yǎng)環(huán)境的氧分壓保持平衡。
測定BOD5時如何確定稀釋倍數(shù)？
稀釋倍數(shù)過大或過小都可能導(dǎo)致5d耗氧量過小或過多，超過正常耗氧量范圍則實驗失敗。但是，由于BOD5的測量周期較長，一旦出現(xiàn)這種情況，就不能按原樣補充。因此，必須高度重視稀釋因子的確定。
雖然工業(yè)廢水成分復(fù)雜，但BOD5值與CODCr值之比通常在0.2~0.8之間。造紙、印染、化工等行業(yè)的廢水比例較低。一些含有顆粒有機物的廢水，如酒糟廢水等，在測定其BOD5時，會因培養(yǎng)瓶底部的顆粒物沉淀而無法參與生化反應(yīng)，導(dǎo)致顯著下降。較低的比率。
稀釋倍數(shù)的確定原則是測定BOD5時5d耗氧量應(yīng)大于2mg/L，剩余溶解氧應(yīng)大于1mg/L。稀釋后第二天培養(yǎng)瓶中的DO為7～8.5mg/L。假設(shè)5d耗氧量為4mg/L，稀釋因子為CODCr值與0.05、0.1125、0.175 三個的乘積系數(shù)。
例如在250mL培養(yǎng)瓶中CODCr為200mg/L時測定BOD5時，三個稀釋因子為：①200×0.005=10倍，②200×0.1125=2< @2.5 次，③200×0.175=35 次。如果采用直接稀釋法，取水樣體積為：①250÷10=25mL，②250÷2<@2.5≈11mL，③250÷35≈7mL。
按照這個采樣培養(yǎng)，會有1到2個符合上述兩個原則的溶解氧測量結(jié)果。如果有兩個稀釋倍數(shù)滿足上述原則，計算結(jié)果時應(yīng)取平均值。如果剩余溶解氧小于1mg/L甚至為零，則應(yīng)增加稀釋倍數(shù)。如果培養(yǎng)過程中溶解氧消耗量小于2mg/L，可能是稀釋倍數(shù)過大；另一個可能是微生物菌種不合適，活性差，或者有毒物質(zhì)濃度太大，此時稀釋倍數(shù)也可能很大。培養(yǎng)瓶反而消耗更多溶解氧的現(xiàn)象。
若稀釋水為接種稀釋水，由于空白水樣耗氧量0.3～1.0mg/L，稀釋系數(shù)分別為0.05、0.125 和 0.2。
如果已知水樣CODCr的具體數(shù)值或近似范圍，則根據(jù)上述稀釋系數(shù)更容易分析BOD5值。當(dāng)水樣的 CODCr 范圍未知時，為了縮短分析時間，可在 CODCr 測定過程中進行估算。
具體方法是：先配制每升含0.4251g鄰苯二甲酸氫鉀的標(biāo)準溶液（此溶液的CODCr值為500mg/L），然后分別稀釋至CODCr值為400mg/L和300mg . /L、200mg/L、100mg/L稀溶液。
吸取20.0mL CODCr值為100mg/L～500mg/L的標(biāo)準溶液，按常規(guī)方法加入試劑，測定CODCr值。加熱煮沸回流30分鐘后，讓它冷卻至室溫并用蓋子儲存以制成標(biāo)準的比色系列。在按常規(guī)方法測定水樣CODCr值的過程中，煮沸回流30分鐘后，對比預(yù)熱后標(biāo)準CODCr值的色柱，估算水樣的CODCr值，然后在測試 BOD5 時確定稀釋系數(shù)。
對于含有難消化有機物的印染、造紙、化工等工業(yè)廢水，必要時應(yīng)在煮沸回流60分鐘后進行比色測定。煮沸回流30分鐘后，對比預(yù)熱后標(biāo)準CODCr值的色柱，估算出水樣的CODCr值，再測定BOD5時的稀釋倍數(shù)。對于含有難消化有機物的印染、造紙、化工等工業(yè)廢水，必要時應(yīng)在煮沸回流60分鐘后進行比色測定。
煮沸回流30分鐘后，對比預(yù)熱后標(biāo)準CODCr值的色柱，估算出水樣的CODCr值，再測定BOD5時的稀釋倍數(shù)。對于含有難消化有機物的印染、造紙、化工等工業(yè)廢水，必要時應(yīng)在煮沸回流60分鐘后進行比色測定。
