０ 引 言 *為吩噻嗪類的衍生物，白色或淡黃色結(jié)晶粉末，臨床為精神障礙類藥物，有較強(qiáng)的副作 用，限制了臨床應(yīng)用范圍 。聚乙二醇是乙二醇的高分子聚合物，生物降解性好、無毒副作用 。聚 乙二醇修飾的*藥物，制備成注射型緩釋微球制劑，通過肌肉注射小鼠局部給藥，對(duì)聚乙二醇奮乃 靜接枝物緩釋微球進(jìn)行了小鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究，能夠起到較好的緩釋效果。
１ 儀器與試劑
１．１ 儀器 高效液相色譜儀（日 本 島 津 株 式 會(huì) 社 ＬＣ－１０ＡＴ 型）、ＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ１８色譜 柱（北京迪馬科技有限公 司）、柱溫箱（天津威儀科技有限公司）、臺(tái)式高速離心機(jī)（湖南星科科學(xué)儀器有限公司）、電子分析天平 （上海舜宇恒平科學(xué)儀器公司）、漩渦振蕩器（海門市其林貝爾儀器有限公司）、實(shí)驗(yàn)室超純水儀（西安優(yōu) 普儀器設(shè)備有限公司）、電熱恒溫水浴鍋（天津市泰斯特儀器有限公司）。
１．２ 藥品試劑 *原料藥（湖北鑫潤(rùn)德化工有限公司）、*緩釋微球（自制）、鄰苯二甲酸二乙酯（分析純）、 甲醇（色譜純）、三乙胺（分析純）、醋酸（分析純）、二氯甲烷（分析純）、小鼠（哈爾濱醫(yī)科大學(xué)）。
２ *體內(nèi)血藥濃度分析方法的建立
２．１ *標(biāo)準(zhǔn)液與內(nèi)標(biāo)液的制備 精確稱取*原料０．２５ｇ置于小燒杯中，用甲醇溶解，將溶液轉(zhuǎn)移入２５０ｍＬ棕色容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，配制成１．００ｍｇ／ｍＬ的儲(chǔ)備液 Ａ；精確移取儲(chǔ)備液 Ａ２．５ｍＬ于２５０ｍＬ棕色容量 瓶中，搖勻稀釋至刻度，配制成１０μｇ／ｍＬ的儲(chǔ)備液 Ｂ；均置于冰箱４ ℃下保存，待用 。經(jīng)實(shí)驗(yàn)摸索，用鄰苯二甲酸二乙 酯為內(nèi) 標(biāo) 物。精 確 稱 取 鄰 苯 二 甲 酸 二乙酯０．２５ｇ，置于２５０ｍＬ 棕色容 量瓶 中，用 甲 醇 溶 解 并 稀 釋 至 刻 度， 配制成１．００ ｍｇ／ｍＬ 的鄰 苯 二 甲 酸 二乙酯甲 醇 溶 液 Ａ。精 確 移 取 鄰 苯 二甲酸二乙酯甲醇溶液 Ａ２．５ｍＬ于 ２５０ ｍＬ 棕 色 容 量 瓶 中，得 到 １０ μｇ／ｍＬ的鄰苯 二 甲 酸 二 乙 酯 的 甲 醇 溶液 Ｂ。置 于 冰 箱 ４ ℃ 下 保 存，待用。
２．２ 液相色譜條件 色譜柱 為 ＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ１８柱（２５０ ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）；流動(dòng)相為ｐＨ 為３．４的緩 沖 液（５００ ｍＬ 超純水中空白血漿中加內(nèi)標(biāo)物鄰苯二甲酸二乙酯高效液相色譜圖 加入２ ｍＬ 三乙 胺，用 冰 醋 酸 調(diào) 節(jié) ｐＨ 為３．４）－甲 醇 （３２：６８）；流 速 ０．８ ｍＬ／ ｍｉｎ；柱溫３０℃；檢測(cè)波長(zhǎng)２５８ｎｍ；進(jìn)樣 量２０μＬ。
２．３ 血漿樣品的處理 精確 抽 取 ０．２５ ｍＬ 血漿 樣 品 放 到 錐形離心管中，精確滴入甲醇０．１５ｍＬ， 漩渦震蕩３ｍｉｎ，離心機(jī)１００００ｒｐｍ 轉(zhuǎn) 速高速 離 心１０ ｍｉｎ，濾去 混 濁 物，轉(zhuǎn) 移 上清液至 另 一 離 心 管，在 ８０ ℃ 水浴 條 件下 揮 干 甲 醇，再 向 該 離 心 管 中 滴 加１ ｍＬ 二氯甲烷，渦旋振 蕩３ ｍｉｎ，離心 機(jī) １００００ｒｐｍ 的轉(zhuǎn)速高速離心１０ｍｉｎ，濾 去混濁物，得 到 清 液，５０ ℃水浴 條 件 下 揮干二氯甲烷。向離心管中加入０．２５ｍＬ 流動(dòng)相復(fù)溶，０．２２μｍ 微孔濾膜過濾，高效液相色譜進(jìn)樣２０ μＬ。
３ *緩釋微球小鼠體內(nèi)血藥濃度分析
３．１ 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作 昆明種小鼠，共４０只，雄鼠２０只，雌鼠２０只，實(shí)驗(yàn)前禁食１２ｈ，給藥４ｈ后統(tǒng)一喂食。
３．２ 小鼠給藥方案 按照成人體重*的給藥劑量換算，按２０天計(jì)算小鼠給藥劑量，每只小鼠注射聚乙二醇* 接枝物的緩釋微球的劑量為２３ｍｇ（含*藥０．３ｍｇ），即精密稱取２３ｍｇ聚乙二醇*接枝物的 緩釋微球４０份，分別置于１．５ｍＬ 離心管中，加入０．１ｍＬ 注射級(jí)大豆油，渦旋震蕩３ｍｉｎ，超聲震蕩５ ｍｉｎ，得聚乙二醇*接枝物的緩釋微球注射劑。用１ｍＬ注射器抽取注射劑，分別給每只小鼠注射*緩釋微球后平均血藥濃度－時(shí)間曲線 腿外側(cè)皮下注射緩釋藥物 。
３．３ 小鼠血樣采集 從給藥時(shí)刻開始計(jì)時(shí)。在給藥后０．５天，１天，３天，５天，７天，９天，１１天，１３天，１５天，２０天從小鼠 眼眶取血０．５ｍＬ，將取出的血漿立即移入內(nèi)部涂有肝素的小離心管中，３０００ｒｐｍ 離心１０ｍｉｎ，分離得 到血漿，放置在冰箱４ ℃中保存 。每次?。粗恍∈蟮难獦樱咝б合嗌V儀進(jìn)樣分析，代入標(biāo)準(zhǔn)曲 線，取四個(gè)樣品的血藥濃度平均值。
３．４ 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析按照上文的血漿樣品處理方法進(jìn)行操 作，以鄰苯二甲酸二乙酯為內(nèi)標(biāo)物，記錄奮 乃靜的峰面積和鄰苯二甲酸二乙酯的峰面 積，取比值代入*血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線。 小鼠在 注 射 奮 乃 靜 緩 釋 微 球 之 后，各 時(shí)間點(diǎn)血藥濃度的平均值與時(shí)間的關(guān)系。 注射*緩釋微球制劑第５天左右小鼠血藥濃度達(dá)到高值，*血藥濃度約為５５ｎｇ／ｍＬ，且在其后８天血藥濃度較為平穩(wěn)，*血藥 濃度維持在５５～６０ｎｇ／ｍＬ之間，在注射*緩釋微球制劑后１３天血藥濃度開始下降，*血藥 濃度為５０ｎｇ／ｍＬ，注射*緩釋微球制劑２０天后，*血藥濃度為３０ｎｇ／ｍＬ。效果較為理想。
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