上海蟻霖科學(xué)儀器有限公司
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閱讀：183發(fā)布時間：2021-11-8
糖尿病是糖尿病患者常見的微血管并發(fā)癥，病變早期出現(xiàn)微量白蛋白，隨病情進(jìn)展，會出現(xiàn)腎小球肥大、腎小球硬化以及腎間質(zhì)纖維化，是終末期的主要病因。西醫(yī)治療糖尿病主要是控制高血糖、高血壓以及減少蛋白尿等對癥治療，目前為止還沒有能*阻斷糖尿病發(fā)生發(fā)展的藥物，因此迫切需要研發(fā)更有效的藥物來預(yù)防或減緩其進(jìn)展。
1 實(shí)驗(yàn)資料
1. 1 儀器
熒光定量 PCＲ 儀( 美國 Applied Biosystems 公司) ; 流式細(xì)胞儀( 上海碧迪醫(yī)療器械有限公司) ; 成像系統(tǒng)( 美國 Bio － Ｒad 公司) ; 低溫高速離心機(jī)( 長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司) ; 電子天平( 上海精密儀器儀表有限公司) ; 移液器( 德國 eppendorf 公司) ; 轉(zhuǎn)膜儀( 美國 Bio － Ｒad 公司) ; 電泳儀( 中國北京六一儀器公司) ; 轉(zhuǎn)移脫色搖床( 江蘇其林貝爾儀器制造有限公司) 。
1. 2 藥品與試劑
參芪補(bǔ)胰方組方: 生黃芪 30 g、太子參 15 g、麥冬 15 g、五味子 6 g、石斛 15 g、生熟地黃各 9 g、黃連 3 g、赤白芍各 9 g、川芎 9 g、丹參 9 g，制備成含生藥 2 g /mL 的藥液，由上海市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院中藥房提供。
1. 3 動物
SPF 級 SD 雄性大鼠 18 只，體質(zhì)量 180 ～200 g，購自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限責(zé)任公司，動物合格證號: 2015000542372。
1. 4 分組、造模及干預(yù)
18 只雄性 SD 大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng) 1 周后，隨機(jī)抽取 6 只設(shè)為正常組，予普通飲食飼養(yǎng); 其余 12 只予高脂高糖飼料喂養(yǎng) 6 周，證實(shí)大鼠存在胰島素抵抗后，以 30 mg /kg STZ( 溶于 0． 1mmol/L 檸檬酸緩沖液，pH 4． 4) 于大鼠左側(cè)下腹部腹腔注射，正常組注射相同給藥容量的檸檬酸緩沖液。72 h 后剪尾端取血測末梢血血糖，血糖≥16． 7mmol /L 判定為高血糖，未再以 30 mg /kg STZ注射 1 次，此后每 3 d 檢測血糖 1 次，血糖穩(wěn)定≥16. 7 mmol /L 為糖尿病模型造模成功。再繼續(xù)喂養(yǎng)，記錄 24 h 尿量，計(jì)算尿白蛋白排泄率大于 30 mg為糖尿病造模成功。將造模成功的 12 只大鼠標(biāo)號，隨機(jī)等分為模型組和參芪補(bǔ)胰方組，參芪補(bǔ)胰方組給予 10 mL /kg 參芪補(bǔ)胰方藥液灌胃，模型組和正常組給予等量生理鹽水灌胃，均連續(xù) 12 周。
1. 5 血糖及尿白蛋白水平檢測
末次灌胃結(jié)束后，采集 3 組大鼠 24 h 尿液，采用考馬斯亮藍(lán)法檢測 24h 尿白蛋白水平; 大鼠禁食 12 h，以 10% *1． 0 mL 腹腔注射麻醉，腹主動脈采血，室溫靜置 1h，3 000 r/min 離心 10 min，分離血清檢測血糖水平。
1. 6 腎形態(tài)學(xué)觀察
摘除各組大鼠腎臟，生理鹽水沖洗干凈，多聚甲醛固定后，脫水、包埋、切片，進(jìn)行PAS 染色以及 Masson 染色。
2 結(jié) 果
大鼠一般情況及血糖、尿白蛋白水平比較造模成功大鼠均出現(xiàn)多飲、多尿、多食、消瘦現(xiàn)象，正常組大鼠則沒有什么變化，參芪補(bǔ)胰方組大鼠較造模組大鼠多飲、多尿、多食、消瘦等現(xiàn)象有明顯改善。模型組大鼠血糖及 24 h 尿蛋白水平均明顯高于正常組( P 均 ＜ 0． 05) ; 參芪補(bǔ)胰方組大鼠血糖及 24 h尿蛋白水平均明顯低于模型組( P 均 ＜ 0． 05) 。見表 1。
3 討 論
糖尿病是導(dǎo)致糖尿病患者終末期和慢性腎衰竭的主要原因，大約 40% 的糖尿病患者會發(fā)生糖尿病。糖尿病的發(fā)生機(jī)制比較復(fù)雜，其中炎癥反應(yīng)在其發(fā)展和發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用。相關(guān)研究證實(shí)，大量的促炎因子包括 TNF － α、IL － 18、IL － 1β 和 MCP － 1 在糖尿病腎病中特異表達(dá)，引發(fā)炎癥瀑布反應(yīng)，產(chǎn)生大量氧自由基，導(dǎo)致糖尿病患者腎臟結(jié)構(gòu)破壞。因此，阻斷炎性激活通路可能對防治糖尿病具有重要意義。
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