材料和方法
病例的一般資料收集 2016 年 8 月-2018 年 8 月蚌埠醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院血液內(nèi)科經(jīng)細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、分子生物學(xué)（MICM）確診的初發(fā)急性髓系白血病患者 108 例，其中男 61 例，女 47 例；中位年齡55（13-79）歲。依據(jù) FAB 分型標(biāo)準(zhǔn)：除去 1 例急性混合細(xì)胞白血病，其余 AML-M1 8 例，AML-M245 例，AML-M3 10 例，AML-M4 18 例，AML-M5 25 例，M6 1 例。
試劑與儀器
DNA 提取試劑盒為上海源奇生物醫(yī)藥科技生物公司產(chǎn)品；引物合成為生工生物工程有限公司產(chǎn)品；PCR 試劑盒為日本 TaKaRa 公司產(chǎn)品；瓊脂糖為上海百研生物科技公司產(chǎn)品；TAE 為廣州賽國(guó)生物科技公司產(chǎn)品；溴化乙錠為江蘇凱基生物公司產(chǎn)品。低溫高速離心機(jī)為美國(guó) Thermo 科技公司產(chǎn)品；LX-400 迷你離心機(jī)為海門(mén)市其林貝爾儀器制造有限公司產(chǎn)品；酶標(biāo)儀為美國(guó) BioTek 儀器有限公司；PCR 儀為美國(guó) Applied Biosystems 公司產(chǎn)品；水平式凝膠電泳槽及電泳儀均為上海 Tanon科技公司產(chǎn)品；全自動(dòng)凝膠成像系統(tǒng)為上海 Tanon科技公司產(chǎn)品。基因組 DNA 的制備按照 DNA 抽提試劑盒說(shuō)明書(shū)要求（上海源奇生物醫(yī)藥科技有限公司）提取基因組DNA，測(cè)定吸光度，所有用于PCR的DNA樣本的OD260/280比值均＞ 1.8，去離子水稀釋基因組 DNA 樣品至 50-150 ng/μl。目的基因的 PCR 擴(kuò)增根據(jù) GenBank 上目標(biāo)基因序列，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成：正義鏈：5′-GACTGAGTACAAACTGGTGG-3′，反義鏈：5′-TGCATAACTGAATGTATACCC-3′，擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度 250bp；PCR 擴(kuò)增的反應(yīng)體系 50 μl：10×PCR buffer（Mg2+）5 μl + dNTP Mixture 4 μl + 引物 F 0.5 μl+ 引物 R 0.5 μl + Tap 酶 0.25 μl + DNA 標(biāo)本 2 μl，去離子水補(bǔ)足體積（PCR 試劑盒來(lái)自寶日醫(yī)生物技術(shù)有限公司）。
結(jié) 果
NRAS 基因 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果及基因測(cè)序圖列于圖 1、圖 2。108 例 AML 患者中發(fā)現(xiàn)，11 例有 NRAS 突變，其中 G12D 6 例、G13D 3例、G61K 2 例，突變率為 10.2%。108 例 AML 患者中 105 例有完整核型分析資料。10 例 NRAS 突變患者擁有可供分析的染色體核型，其中 4 例為正常核型，故其在正常核型中的突變率為 7.84%，與未突變組比較無(wú)明顯差異（P＞ 0.05）。細(xì)胞遺傳學(xué)高危、中危、低?；颊叻謩e 為 1 例、6 例 和 3 例， 所 占 比 分 別 為 12.5%、10.17%、4.55%。3 組間的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析亦無(wú)明顯差異（P＞ 0.05）。
討 論
NRAS 基因編碼是一種 21KD 的膜蛋白，其作為一種“分子開(kāi)關(guān)"，位于細(xì)胞膜表面，可以將細(xì)胞外的信號(hào)轉(zhuǎn)至細(xì)胞核，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化和凋亡 。而 NRAS 突變主要是集中在外顯子 1、2 處涉及 12、13、61 密碼子的錯(cuò)義突變，其作為目前*的致人 AML 的 2 類(lèi)合作突變中的Ⅰ類(lèi)突變，賦予細(xì)胞增殖和生存優(yōu)勢(shì)，從而參與 AML的發(fā)生發(fā)展。
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