研究了氣相色譜法測(cè)定生物組織中克侖特羅（Clenbuterol）殘留的分析方法。試樣中Clenbuterol用0.5mol/L鹽酸提取，再用NaOH調(diào)堿后以氯仿萃取。萃取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，氮?dú)獯蹈珊笠约状级ㄈ荨?后用氣相色譜法以HP1701毛細(xì)管柱分離，氮磷檢測(cè)器測(cè)定。研究表明，Clenbuterol色譜峰分離良好，回收率在72%~84%之間，變異系數(shù)為2.6%~5.7%，檢出濃度為0.01mg/kg。
1.前言
出自：
克侖特羅俗稱“瘦肉精”，是人工合成的β-腎上腺素能受體，我國(guó)已正式下文嚴(yán)禁作為飼料添加劑。但目前仍有不少非法使用的情況存在，嚴(yán)重危威脅著人們的健康。目前國(guó)內(nèi)所報(bào)道的檢測(cè)克侖特羅殘留方法多為氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法，液相色譜法[1]，而氣相色譜法測(cè)定尚未有報(bào)道。本文用氣相色譜法對(duì)測(cè)定生物組織中克侖特羅的殘留進(jìn)行了研究，建立了樣品提取簡(jiǎn)單，色譜峰分離良好，靈敏度高的測(cè)定方法，取得了滿意的結(jié)果。
2.實(shí)驗(yàn)部分
2.1.儀器與試劑
Agilent6890氣相色譜儀，附氮磷檢測(cè)器（NPD），HP6890化學(xué)工作站，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，離心機(jī)，超聲清洗器，組織搗碎機(jī)。
鹽酸0.5mol/L
*400g/L
氯仿、甲醇、，均為分析純。
標(biāo)準(zhǔn)，購(gòu)于SIGMA公司，用甲醇配成100μg/ml的儲(chǔ)備液。
2.2.樣品處理
取切碎后生物組織樣品約100g，放入組織搗碎機(jī)勻漿5min，取10.0~20.0g勻漿液，加入30ml鹽酸，超聲提取15min，并不時(shí)攪拌。后以4000轉(zhuǎn)/min離心10min，取上清液倒入150ml分液漏斗；對(duì)下層沉積組織再重復(fù)提取一次。合并上清提取液，滴加*溶液調(diào)PH至12。加入15ml氯仿，輕輕振搖萃取，靜止放置5min分層，放出下層氯仿，過(guò)置有30~40g的漏斗收集。并再分別以10ml的氯仿重復(fù)萃取兩次，收集合并萃取液，后以20ml氯仿洗滌合并收集液。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器于55℃水浴上蒸發(fā)至約1ml，氮?dú)獯蹈?。以甲醇定容?.0ml即為試液，取1.0μl進(jìn)行色譜分析。
2.3.色譜條件
HP-1701石英毛細(xì)管柱（25m×0.20mm×0.20μm）；載氣為高純N2，柱壓為140KPa，柱溫為初溫170℃，0.5min后以25℃/min上升至240℃保持7min，進(jìn)樣口270℃，不分流，吹掃時(shí)間0.5min，100ml/min；檢測(cè)器溫度290℃，尾吹氣為8ml/min。
2.4.標(biāo)準(zhǔn)曲線
分別取適量的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，以甲醇稀釋配成2.0、4.0、10.0、20.0μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)工作液，進(jìn)樣1.0μl分析。并以峰面積對(duì)濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)方程為：Y=43.5X+6.3，Y為峰面積，X為濃度（μg/ml），r=0.9998。
3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
3.1.回收率與精密度試驗(yàn)
以保留時(shí)間定性，峰面積定量。分別取豬肝與豬瘦肉樣品10.0g，分別添加1.00及0.50mg/kg水平濃度的標(biāo)準(zhǔn)，同一水平加標(biāo)分別做四份測(cè)定，計(jì)算回收率與精度。
3.2.樣品提取與凈化
3.2.1.樣品的提取
樣品液的提取是極為重要的實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)。由于在酸性條件下，克侖特羅溶于水而幾乎不溶于氯仿等有機(jī)溶劑，本文選擇用鹽酸超聲兩次提取，提取速度快而*，效果良好。
若采用樣品加100ml的鹽酸超聲提取20min后，直接過(guò)濾，由于鹽酸提取液中含有大量的蛋白質(zhì)與脂肪類物質(zhì)，使提取液呈膠液狀，很難過(guò)濾。
實(shí)驗(yàn)曾采用對(duì)樣品加鹽酸超聲提取后，直接調(diào)堿再加乙酸鋅沉淀蛋白質(zhì)并過(guò)濾，濾液再以氯仿萃取，雖然有效解決了萃取中的乳化問(wèn)題，但結(jié)果回收率均小于30%?？赡転樵趬A性條件下沉淀的蛋白質(zhì)類絮狀物吸附了引起。
3.2.2.萃取溶劑的選擇
在堿性條件下，克侖特羅溶于有機(jī)溶劑而微溶于水。將提取液用*調(diào)堿后，用乙酸乙酯作為萃取劑，但實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，乙酸乙酯振搖后乳化嚴(yán)重，有機(jī)層浮于提取液上，分離較為麻煩。再對(duì)氯仿、二氯甲烷兩種有機(jī)萃取劑進(jìn)行分析比較，發(fā)現(xiàn)二氯甲烷乳化也較為嚴(yán)重，沉淀分層困難。而氯仿相對(duì)比重高，容易沉淀，雖也會(huì)有輕微乳化現(xiàn)象產(chǎn)生，但只要不用力振搖萃取，沉淀分層較二氯甲烷理想，萃取效果較好。
3.2.3.樣品凈化
在氣質(zhì)譜聯(lián)用和液相色譜的不少分析方法中，均提到了在色譜分析前，須過(guò)固相萃取柱或氧化鋁柱凈化，以排除干擾峰。本實(shí)驗(yàn)對(duì)鹽酸提取液調(diào)堿后用氯仿萃取，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，氮?dú)獯蹈桑?后用甲醇溶解定容，直接進(jìn)樣分析。省去過(guò)柱步驟，得到色譜峰分離良好，峰形清晰，未發(fā)現(xiàn)有明顯干擾現(xiàn)象。
3.4.檢出濃度
以3倍色譜基線噪音為檢出限，若取樣為10.0g，則本法檢出濃度為0.01mg/kg。
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