進(jìn)行非標(biāo)記細(xì)胞功能分析培養(yǎng)注意事項(xiàng)有哪些

時(shí)間：2021/4/1閱讀：286

　　非標(biāo)記細(xì)胞功能分析培養(yǎng)采用特殊工藝，將微電子細(xì)胞傳感器芯片整合到表面適于細(xì)胞貼附與生長(zhǎng)的細(xì)胞檢測(cè)板的底部或細(xì)胞浸潤(rùn)遷移板的微孔膜，用以構(gòu)建實(shí)時(shí)、動(dòng)態(tài)、定量跟蹤細(xì)胞形態(tài)和增殖分化等改變的細(xì)胞阻抗檢測(cè)傳感系統(tǒng)。

　　注意事項(xiàng)：

　　細(xì)胞培養(yǎng)好壞，模型建立成功與否是后續(xù)藥物代謝和運(yùn)輸機(jī)制研究的關(guān)鍵。因此，建議針細(xì)胞培養(yǎng)過程進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)控。

　　非標(biāo)記細(xì)胞功能分析培養(yǎng)鋪板前需要對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的狀態(tài)進(jìn)行鑒定，要求細(xì)胞死亡率不超過5%，同時(shí)，消化離心需要去除碎片和較大的細(xì)胞團(tuán)。

　　細(xì)胞鋪板需要將濾膜進(jìn)行提前濕潤(rùn)，并且控制細(xì)胞密度，以防止細(xì)胞形成多層。并且建議16h內(nèi)進(jìn)行換液，以清除未貼壁的細(xì)胞或者減少細(xì)胞疊層的發(fā)生。

　　常規(guī)來說，細(xì)胞需要在濾膜上培養(yǎng)21-29天，以其表面表達(dá)多種轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和水解酶為標(biāo)志，代表細(xì)胞的分化。對(duì)于后續(xù)的轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞培養(yǎng)有一個(gè)前提就是需要單層細(xì)胞，而不是多層。因此，需要對(duì)細(xì)胞是否為單層進(jìn)行形態(tài)學(xué)方面的探究。

　　對(duì)于每批次的細(xì)胞來說，需要對(duì)細(xì)胞單層完整性的量化控制對(duì)照實(shí)驗(yàn)，比較推薦用親水性的細(xì)胞旁路分子marker，做轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)，可以利用14C-*（帶輻射性）或者luciferyellow（沒有輻射性）對(duì)細(xì)胞單層完整性進(jìn)行評(píng)估。

　　共聚焦顯微鏡條件下的形態(tài)評(píng)估，通常而言，利用鬼比環(huán)肽（對(duì)actin蛋白染色）單染，其足夠確認(rèn)細(xì)胞是否為單層狀態(tài)，非標(biāo)記細(xì)胞功能分析培養(yǎng)也可以利用緊密連接蛋白ZO-1或者熒光核染做免疫熒光染色進(jìn)行確認(rèn)。

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