葉綠素的提取和分離如何操作？如果是為了測(cè)量葉綠素含量的話，小編還是建議大家利用葉綠素測(cè)量?jī)x直接檢測(cè)，就省去了提取和分離環(huán)節(jié)。但如果是用于其他研究的話，掌握以下方法還是非常重要的。
一、葉綠素的提取
葉綠素提取的準(zhǔn)備工作是在一個(gè)半暗的房間里，室溫保持在25℃。提取步驟如下：
(1)取1000克新鮮的綠葉，在韋氏攪切器中粉碎。
(2)將粉碎的1000克綠葉放進(jìn)加有少量的碳酸鈣的丙酮中(溫度20℃)進(jìn)行萃取，直到過(guò)濾、清洗后的葉子碎片為無(wú)色。
(3)將過(guò)濾后的丙酮提取液放到盛有1升石油醚和100ml丙酮的漏斗中，然后輕輕地旋轉(zhuǎn)，同時(shí)加放蒸餾水直到分層為止。水層的大部分丙酮和水溶雜質(zhì)被丟棄，只剩石油醚溶液。
(4)將石油醚溶液用蒸餾水再次凈化后，用含有石油醚和0.01克草酸的200ml80%的甲醇溶液清洗5次以上，最后得到黃綠色懸浮液。
(5)用對(duì)懸浮液進(jìn)行干燥，并將其滲入到3cm厚的蔗糖粉末制成柱中，然后用石油醚清洗沉淀的色素去掉類胡蘿卜素，使之只含有天然的葉綠素。
(6)含有天然葉綠素的蔗糖柱分兩層，綠層有4-10mm的葉綠素b層，另一藍(lán)層為2-6mm的葉綠素a層。
(7)將位于藍(lán)層正中的部分(約占藍(lán)層的一半) 放入醚中，對(duì)此懸浮液進(jìn)行過(guò)濾、洗提，用蒸餾水清洗，用干燥，再用器皿進(jìn)行過(guò)濾后，得到葉綠素a。
(8)將(6)中的綠層中間部分移出，迅速放入醚中過(guò)濾、洗提，制成葉綠素b醚溶液。
二、葉綠素的分離
(1)制備濾紙條：剪去一端兩角，在距離剪角一端1~1.5 cm處用鉛筆畫線（或簡(jiǎn)單做個(gè)記號(hào)）。
(2)畫濾液細(xì)線：用毛細(xì)吸管吸收少量濾液，沿鉛筆線（記號(hào)）處均勻地畫一條直的濾液細(xì)線。干燥后，連續(xù)重復(fù)3～5次，至濾液細(xì)線呈綠色。
(3)分離色素：倒入層析凍存管2～3 ml層析液，適當(dāng)調(diào)節(jié)層析液液面，以放入濾紙條后樣品線至少稍稍高出濾液為宜。以將濾紙條朝下略微斜靠燒杯內(nèi)壁，輕輕插入層析液，旋緊蓋子。
(4)觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果并記錄實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象：當(dāng)推動(dòng)劑前沿接近濾紙上端邊緣時(shí)，取出濾紙，自然晾干，觀察色帶的分布：四種色素在濾紙上的移動(dòng)速度是胡蘿卜素(橙黃色)>葉黃素(黃色)>葉綠素a(藍(lán)綠色)>葉綠素b(黃綠色) 。用鉛筆標(biāo)出各種色素的位置和名稱。
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