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閱讀：338發(fā)布時(shí)間：2025-9-9
近年來，固相萃取技術(shù)應(yīng)用得到快速發(fā)展，已廣泛應(yīng)用于食品、環(huán)境、制藥等行業(yè)，成為樣品前處理凈化的有效手段之一?？墒牵脩粼诠滔噍腿∵^程中也會(huì)遇到各種各樣的問題。
以下是固相萃取操作中常見的問題：
在一次完整的SPE操作中，目標(biāo)化合物可能會(huì)存在于樣品溶液流出液、淋洗液、洗脫液或吸附劑中，當(dāng)“目標(biāo)物沒有回收或回收率低" 現(xiàn)象發(fā)生時(shí)，可向樣品溶液加入標(biāo)液，然后進(jìn)行完整的SPE操作并將樣品流出液、淋洗液和洗脫液分別收集并分析，首先確定目標(biāo)化合物存在于哪一部分，進(jìn)而確定問題來自下列哪一環(huán)節(jié)：
當(dāng)超過5%的目標(biāo)化合物出現(xiàn)在樣品流出液或淋洗液時(shí)即可斷定“目標(biāo)化合物在吸附劑上的保留不足"。具體的原因如下：
a)SPE柱選擇不合適；
b)樣品容積和淋洗液的洗脫強(qiáng)度過強(qiáng)；
c)樣品溶液體積或濃度過高，發(fā)生“穿透"；
d)沒有很好的對(duì)SPE柱進(jìn)行預(yù)處理。
當(dāng)目標(biāo)化合物在樣品溶液流出液和淋洗液中未出現(xiàn)而洗脫液中僅有少量或未出現(xiàn)時(shí)，可判斷“目標(biāo)物未被洗脫"。具體的原因如下：
a)小柱對(duì)化合物保留太強(qiáng)，找不到合適的洗脫溶劑；
b)洗脫液洗脫強(qiáng)度不夠；
c)洗脫液體積太小。
如果目標(biāo)化合物在洗脫液中正常出現(xiàn)，那么回收率不足的問題應(yīng)該來自樣品前處理的其他環(huán)節(jié)。具體的原因如下：
a)SPE前的提取效率不足；
b)前處理步驟太繁瑣，目標(biāo)化合物損失；
c)目標(biāo)物揮發(fā)性較強(qiáng)，在濃縮步驟損失；
d)目標(biāo)化合物在前處理溶劑環(huán)境中分解。
在使用固相萃取小柱進(jìn)行樣品前處理時(shí)，若出現(xiàn)萃取效果重現(xiàn)性差，可能的原因及改進(jìn)辦法如下：
1、上樣前，柱床干涸。改進(jìn)方法：重新火花并平衡。
2、吸附劑填裝不緊。改進(jìn)方法：提出換貨，或用小棍擠壓柱床。
3、樣品液流速過快。改進(jìn)方法：降低流速，通常來說流速低于5mL/min時(shí)，結(jié)果是穩(wěn)定的。
4、超出小柱的載樣能力。改進(jìn)方法：減小載樣量，或用規(guī)格更大的SPE小柱。
5、洗脫機(jī)用量不足。改進(jìn)方法：增加洗脫機(jī)的用量或者用更小規(guī)格的SPE小柱。
通常而言采用保留目標(biāo)化合物的模式比保留雜質(zhì)的模式凈化效果好，如果正在分析的項(xiàng)目為某一種或某一類化合物分析，是采用保留目標(biāo)化合物的凈化模式；舉一個(gè)簡(jiǎn)單的例子，同樣是分析蔬菜中的多菌靈和噻菌靈(一類堿性農(nóng)藥)，使用陽離子交換柱可以專一性地保留這些農(nóng)藥，使它們基本與干擾物分離，而使用正相吸附劑或石墨化炭黑進(jìn)行保留干擾物的操作僅能把主要的干擾物除去，仍有較多干擾物存留。
另外，如果不止一種SPE柱可用于目標(biāo)化合物的凈化時(shí)，應(yīng)挑選選擇性好的吸附劑；選擇性方面，離子交換＞正相＞反相。
對(duì)于反相模式和正相模式，應(yīng)在不影響回收率的前提下，增大淋洗液洗脫的強(qiáng)度并降低洗脫液的洗脫強(qiáng)度。
對(duì)于反相模式，可將目標(biāo)化合物的水溶液上樣，然后依次用5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、99%的甲醇水溶液洗脫，分別收集洗脫液分析，建立淋洗曲線，找出目標(biāo)化合物被洗脫時(shí)的溶劑體系，淋洗液中甲醇的含量應(yīng)稍低于目標(biāo)化合物恰好被洗脫時(shí)的溶劑體系，而洗脫液中甲醇的含量應(yīng)稍高于目標(biāo)化合物恰好被洗脫時(shí)的溶劑體系；當(dāng)純甲醇不能洗脫目標(biāo)化合物時(shí)，應(yīng)試驗(yàn)甲醇-甲基叔丁基醚混合溶液的洗脫曲線；對(duì)于某些既不溶于水也不溶于甲醇的離子型化合物，可以在溶劑體系中加入酸或堿。
對(duì)于正相體系，可將目標(biāo)化合物的正己烷溶液上樣，然后依次用5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、99%的正己烷甲基叔丁基醚溶液洗脫，分別收集洗脫液分析，建立淋洗曲線，找出目標(biāo)化合物被洗脫時(shí)的溶劑體系，淋洗液中甲基叔丁基醚的含量應(yīng)稍低于目標(biāo)化合物恰好被洗脫時(shí)的溶劑體系，而洗脫液中甲基叔丁基醚的含量應(yīng)稍高于目標(biāo)化合物恰好被洗脫時(shí)的溶劑體系。
SPE柱中的吸附劑可能存在少量干擾物，有效地活化可以避免這些干擾物進(jìn)入洗脫液，活化溶液應(yīng)選擇整個(gè)操作中洗脫強(qiáng)度的溶劑體系；在反相模式中，從樣品溶液到洗脫液主要涉及0%-99%甲醇水溶液，所以活化溶液應(yīng)選純甲醇，當(dāng)目標(biāo)化合物需要用甲醇-甲基叔丁基醚混合液洗脫時(shí)，活化溶液應(yīng)選甲基叔丁基醚；在正相模式中，從樣品溶液到洗脫液主要涉及0%-99%正己烷-甲基叔丁基醚溶液，所以活化溶液應(yīng)選純甲基叔丁基醚。
使用固相萃取小柱過程中，若出現(xiàn)SPE柱流速過低的情況，可能的原因及改進(jìn)辦法如下：
1、樣品溶液含有較多顆粒雜質(zhì)，堵塞了篩板。改進(jìn)辦法：上樣前對(duì)樣品溶液進(jìn)行離心或過濾。
2、樣品溶液黏度太高。改進(jìn)辦法：用樣品溶液對(duì)樣品進(jìn)行稀釋。
3、SPE柱柱床太高，對(duì)液體的阻力過大。改進(jìn)辦法：使用輔助工具：使用固相萃取儀，并在液體路出口減壓；在液體入口加壓。
其實(shí)，只需要一臺(tái)鼎泰恒勝全自動(dòng)固相萃取儀，就可以避免大部分的問題。自動(dòng)完成固相萃取全過程：柱活化-上樣-柱淋洗-柱干燥-柱洗脫，自動(dòng)完成柱切換等功能，實(shí)現(xiàn)批量樣品的處理。
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