技術(shù)簡介

雙熒光素酶報告實驗（Dual-luciferase reporter assay，DLR）是一種在生物學(xué)研究中廣泛應(yīng)用的技術(shù)，主要用于解析基因表達調(diào)控機制，可定量評估轉(zhuǎn)錄因子與靶基因啟動子的相互作用及啟動子活性。

技術(shù)原理

該實驗通常使用螢火蟲熒光素酶（Fire?y Luciferase）和海腎熒光素酶（Renilla Luciferase）雙報告系統(tǒng)：

?螢火蟲熒光素酶基因常作為報告基因，與目標(biāo)基因的啟動子序列構(gòu)建在同一載體上，其表達直接受目標(biāo)啟動子調(diào)控。

?海腎熒光素酶基因作為內(nèi)參基因，由組成型啟動子驅(qū)動，在細胞內(nèi)穩(wěn)定表達。

當(dāng)細胞同時轉(zhuǎn)染含有這兩種基因的載體后，加入相應(yīng)的熒光素底物，兩種熒光素酶會催化底物發(fā)光。通過檢測兩種熒光信號的強度比值（Luc/Ren），可歸一化處理實驗數(shù)據(jù)，消除細胞轉(zhuǎn)染效率、細胞活性等因素對實驗結(jié)果的影響，從而準(zhǔn)確反映目標(biāo)啟動子的活性。

適用場景

?轉(zhuǎn)錄因子與調(diào)控序列的互作驗證

?miRNA與靶mRNA的互作驗證

?miRNA與IncRNA的靶向互作驗證

?轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控活性分析

?啟動子活性檢測

?啟動子結(jié)構(gòu)功能分析

?啟動子單核苷酸多態(tài)性(SNP)分析

技術(shù)流程

結(jié)果示例