浙江納德科學(xué)儀器有限公司
會(huì)員1.png)
浙江納德科學(xué)儀器有限公司
閱讀：85發(fā)布時(shí)間：2026-2-3
生物材料由許多化學(xué)鍵組成，隨著溫度的升高，材料內(nèi)能增加同時(shí)化學(xué)鍵斷裂。這種因化學(xué)鍵斷裂而導(dǎo)致生物材料結(jié)構(gòu)改變的現(xiàn)象被稱作熱變性。此外，時(shí)的變性溫度被稱為熔解溫度。熔解溫度是用于表征材料穩(wěn)定性的指標(biāo)之一。
寡核苷酸是一種遺傳物質(zhì)，由多組堿基構(gòu)成。寡核苷酸可以很容易地和它們的互補(bǔ)對(duì)鏈接，所以常用來作為探針確定DNA或RNA的結(jié)構(gòu)，經(jīng)常用于基因芯片、電泳、熒光雜交等過程中。
本實(shí)驗(yàn)采用Thermo Fisher公司的lumina熒光分光光度計(jì)配備 Peltier 溫控系統(tǒng)對(duì)不同溫度下的熒光性能進(jìn)行了測(cè)量。Peltier溫控系統(tǒng)可快速精準(zhǔn)地對(duì)溫度進(jìn)行調(diào)節(jié)，溫度范圍可控制在-10℃到100℃。該系統(tǒng)有樣品除霜功能、磁力攪拌功能和溫控功能。本研究采用 Lumina 和 Peltier系統(tǒng)，結(jié)合熒光標(biāo)記，研究了寡核苷酸熒光強(qiáng)度與溫度的關(guān)系。根據(jù)一階導(dǎo)數(shù)分析熔點(diǎn)曲線并計(jì)算出了TM 值。
如圖1所示，我們將Alexa Fluor® 488 熒光探針標(biāo)記在寡核苷酸的5′ 端部，將Alexa Fluor® 532 熒光探針連接在另一端。
實(shí)驗(yàn)步驟
1.添加 10ml 的 Tris-EDTA 緩沖液（pH 8.0）到兩根塑料管中，形成濃度分別為172mM（供體）和
190mM（受體）的NaCl溶液。
2.在上述緩沖液中溶解供體/受體寡核苷酸，使?jié)舛茸優(yōu)?00nM。
3.混合已制備的供體試劑和受體試劑，然后在室溫下培養(yǎng)5分鐘。
4.將Peltier系統(tǒng)安裝在 Lumina上。
5.打開Luminous的Thermal軟件，如圖3輸入預(yù)定參數(shù)。使用軟件（Excel®, Origin®等）根據(jù)供體各測(cè)量點(diǎn)數(shù)據(jù)計(jì)算一階導(dǎo)數(shù)，并在測(cè)查看TM 值。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
FRET 現(xiàn)象是供體到受體的一種能量轉(zhuǎn)移現(xiàn)象，這是由于熒光物質(zhì)受熱前熒光探針間距離較短造成的。因此，在供體激發(fā)波長(zhǎng)519nm處發(fā)出較弱的熒光，在受體的激發(fā)波長(zhǎng)553nm處發(fā)出較強(qiáng)的熒光。另一方面，隨著受熱產(chǎn)生的熱變性現(xiàn)象，與FRET現(xiàn)象相反。換句話說，熒光在519nm時(shí)較強(qiáng)，而在553nm時(shí)較弱.
如圖5所示，我們繪制了供體、受體熒光強(qiáng)度與溫度的關(guān)系?？梢源_認(rèn)，供體和受體上發(fā)生的熒光強(qiáng)度逆轉(zhuǎn)的情況是由于FRET 現(xiàn)象消失導(dǎo)致的。
目前有多種方法可以確定TM 值，本實(shí)驗(yàn)中我們通過一階導(dǎo)數(shù)的峰值來確定TM 值。本次試驗(yàn)所用寡核苷酸的TM 值為49℃。（圖6）
了解Thermo Fisher公司的lumina熒光分光光度計(jì)，詳詢Thermo熒光分光光度計(jì)省總代理浙江納德科學(xué)儀器有限公司，詳詢電話：。
儀表網(wǎng) 設(shè)計(jì)制作，未經(jīng)允許翻錄必究 .? ? ?
請(qǐng)輸入賬號(hào)
請(qǐng)輸入密碼
請(qǐng)輸驗(yàn)證碼