人腦紅蛋白 ELISA試劑盒

ELISA關(guān)鍵步驟為以下幾點(diǎn):
1、盡量用八道或者十二道移液器加樣。對(duì)于相同的試劑，經(jīng)如二抗，酶，顯色液，終止液等。
2、自己的樣品，因?yàn)槊恳豢椎臉悠凡灰粯?，用排槍加有些麻煩，如果一次的樣品比較少，而自己加樣又比較快，可以一個(gè)孔一個(gè)孔的加，但如果想一次把96或者48T的做完，可以先擺好一些PCR管或者準(zhǔn)備一個(gè)96孔細(xì)胞培養(yǎng)板。將自己的樣品先加到PCR管或者培養(yǎng)板中（此板間距與酶板板相同）。記得加一定的余量，如一次加樣是50ul，可以先加70ul。加完后再用排槍加樣，這樣可以縮短加樣時(shí)間，減小每個(gè)孔間的時(shí)間誤差。
3、如果有多余的孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔可以做復(fù)孔，在自己的樣品前加一次標(biāo)準(zhǔn)品，加完樣品后再加一次標(biāo)準(zhǔn)品。如果孔不夠，那么可以將標(biāo)準(zhǔn)品放在樣品中間加。

樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3. 尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。