ELISA快速檢測(cè)試劑盒與經(jīng)典色譜法相比，具有操作過程簡單、樣品處理快捷，可同時(shí)分析多個(gè)樣品，分析時(shí)間短、成本低、靈敏度高且對(duì)環(huán)境污染小等優(yōu)點(diǎn)。
1 原理
ELISA方法的基本原理是酶分子與抗體或抗體分子共價(jià)結(jié)合，此種結(jié)合不會(huì)改變抗體的免疫學(xué)特性，也不影響酶的生物學(xué)活性。此種酶標(biāo)記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。
2 試樣的準(zhǔn)備
2.1 對(duì)于尿樣可直接用于檢測(cè)，或者樣品比較渾濁時(shí)，可適當(dāng)離心。當(dāng)尿樣冷凍時(shí)，應(yīng)將尿樣回溫再測(cè)。
2.2 飼料樣品要按照說明書的處理步驟進(jìn)行。當(dāng)然，為保證樣品充分被提取，可適當(dāng)延長渦旋時(shí)間、離心時(shí)間及離心轉(zhuǎn)數(shù)。
3 試劑的準(zhǔn)備
3.1 不同批次的試劑盒不能混用，因?yàn)榭贵w和微孔板具有盒與批次的特異性。
3.2 按試劑盒說明書的要求準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)中需用的試劑。ELISA中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液應(yīng)用pH計(jì)測(cè)量較正。
3.3 從冰箱中取出的實(shí)驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次實(shí)驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存。
3.4 IL-11elisa試劑盒檢測(cè)過程中應(yīng)盡量保持室溫20~25℃，避免在通風(fēng)口操作，溫度過低、過熱或蒸發(fā)都會(huì)影響檢測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。同樣不應(yīng)再陽光直射下實(shí)驗(yàn)，防止過熱或蒸發(fā)帶來影響。
4 加樣
4.1 在ELISA中一般有4次加樣步聚，即加標(biāo)本或樣品、酶結(jié)合物、底物、終止液。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡，當(dāng)有氣泡時(shí)可用干凈的槍頭小心刺破。
4.2 加標(biāo)準(zhǔn)及樣品時(shí)一般用微量加樣器，按規(guī)定的量加入板孔中，每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴，以免發(fā)生交叉污染。
4.3 在加酶標(biāo)物、底物、終止液時(shí)，建議盡量使用多道移液槍，以縮短反應(yīng)時(shí)間。尤其是酶標(biāo)物和底物液用定量多道加液器，使加液過程迅速完成。當(dāng)然，多道移液槍適合整板樣品的檢測(cè)，加酶標(biāo)物、底物、終止液時(shí)可整瓶加入。如果只需要對(duì)少量樣品檢測(cè)時(shí)，加酶標(biāo)物、底物、終止液動(dòng)作一定要迅速、準(zhǔn)確，避免槍頭碰壁或液體濺出。