VEGT-Delisa試劑盒實(shí)驗(yàn)常見問題的對策
一、陰性樣本的吸光度值低于陽性吸光度值原因
可能原因是出現(xiàn)跳孔的現(xiàn)象或酶標(biāo)板孔中的試劑未充分的混合。解決的辦法是注意操作的方法，注意洗滌時(shí)的方法、加完試劑后可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動30s，混勻液體。
二、吸光度值偏高是怎么回事
可能引起的原因有孵育的溫度過高、反應(yīng)的時(shí)間過長。相對應(yīng)的解決辦法是調(diào)整孵育環(huán)境的溫度，如無法調(diào)整室內(nèi)的溫度，請將顯色時(shí)間適當(dāng)?shù)目s短、控制反應(yīng)時(shí)間。
三、樣品的稀釋
樣品稀釋前、后的樣品必須充分混勻，所有試劑在加樣前也須搖勻，以保證試驗(yàn)的均一性。
ELISA反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng)，如果血清不稀釋，不可避免會產(chǎn)生很強(qiáng)的非特異性反應(yīng)，出現(xiàn)假陽性。因此，國外檢測血清抗體的試劑盒，均規(guī)定將血清稀釋至適當(dāng)?shù)谋稊?shù)，以降低非特異性反應(yīng)，使特異性的抗原抗體反應(yīng)充分體現(xiàn)出來。一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數(shù)均通過大量試驗(yàn)確定，以保證試驗(yàn)的靈敏度和特異性。但是，有些用戶未能嚴(yán)格按使用說明書操作，如某些產(chǎn)品應(yīng)取10μl樣品進(jìn)行稀釋，個別用戶取5μl甚至1μl樣品進(jìn)行稀釋，由于吸嘴上不可避免地沾有樣品以及微量移液器的精度不夠，因此造成樣品稀釋倍數(shù)不準(zhǔn)確，檢測結(jié)果出現(xiàn)問題。
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