凍存細(xì)胞：

1、選對(duì)數(shù)增生期細(xì)胞(證明無支原體污染)，在凍存前1d換液。

2、按常規(guī)方法把培養(yǎng)細(xì)胞制備成懸液，計(jì)數(shù)，使細(xì)胞密度達(dá)5×10^7／ml左右密度，離心，去上清。

3、加入配制好的凍存液（培養(yǎng)液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml），按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細(xì)胞重懸。凍存細(xì)胞時(shí)培養(yǎng)液中加入保護(hù)劑10％二甲基亞砜(DMSO) 或甘油，可使冰點(diǎn)降低，使細(xì)胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細(xì)胞外。

4、分裝于無菌凍存管中，每管加1.5m懸液。

5、旋好凍存管并仔細(xì)檢查，一定要蓋緊，做好標(biāo)記。

6、凍存：在特殊的儀器或簡(jiǎn)易的液氮容器中，按-1℃／min的速度，在30～40min時(shí)間內(nèi)，下降到液氮表面，再停30min后，直接投入液氮中。要適當(dāng)掌握下降冷凍速度，過快能影響細(xì)胞內(nèi)水分透出，太慢則促進(jìn)冰晶形成。

操作時(shí)應(yīng)戴防護(hù)眼鏡和手套，以免液氮凍傷。