T-2毒素ELISA快速檢測試劑盒

T-2 TOXIN ELISA Kit

(貨號(hào)：Ounuo98006)

一、原理

T-2毒素ELISA快速檢測試劑盒，采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物T-2毒素將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭T-2毒素抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物T-2毒素的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物T-2毒素的含量。

二、試劑盒特性

1）靈 敏 度：   0.05ppb

2） 孵育溫度：   25℃

3） 孵育時(shí)間：   30min～15min

4） 樣本檢測下限

飼料、花生、大米   ········  3 ppb

5） 交叉反應(yīng)率

T-2 毒素  ···············   99.9%

6） 樣本回收率

飼    料   ··············   90±25%

花    生   ················   85±25%

大    米   ················   90±25%

三、、樣本前處理步驟

1） 樣本處理前須知

（a）實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時(shí)要更換吸頭。

（b）實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈，必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

2） 樣本前處理需配制：

配液1  樣本復(fù)溶液： 

將離子水與5×濃縮復(fù)溶液按4：1稀釋。

配液2  樣本提取液： 

將樣本復(fù)溶液與甲醇按1：1比例混合均勻。

3） 樣本處理：

（a） 飼料、花生、大米樣本處理方法：

1、 取1.0±0.05g粉碎后的樣本于50ml離心管中；加入5ml樣本提取液，充分振蕩3min，20℃ 4000r/min以上離心10min；

2、 取上清100μl，加入400μl樣本復(fù)溶液，充分振蕩混勻；

3、 取50μl用于分析。

樣本稀釋倍數(shù)：25倍      

六、 酶標(biāo)免疫分析程序:

1） 測定前應(yīng)須知：

1、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。

2、 使用之后立即將所有試劑放回2～8℃。

3、 在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點(diǎn)。

4、 所有恒溫孵育過程，避免光線照射，用蓋板膜蓋住微孔板。

2） 操作步驟：

1、 從2～8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑，室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2、 取出框架及需要數(shù)量的微孔，將不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。

3、 配液：將15ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。

4、 編號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

5、 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50μl/孔到各自的微孔中，然后加酶標(biāo)記物50μl/孔，再加入50μl/孔的抗體工作液，用蓋板膜蓋板，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境反應(yīng)30min。

6、 將孔內(nèi)液體甩干，用稀釋后的洗滌液250μl/孔洗板4～5次，每次間隔15～30秒，用吸水紙拍干（拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。

7、 顯色：加入底物A液50μl/孔，再加入底物B液50μl/孔，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯色15min。

8、 測定：加入終止液50μl/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，5min內(nèi)讀數(shù)），測定每孔OD值。

七、結(jié)果判定

結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用yi種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含T-2毒素量成負(fù)相關(guān)。