【產品名稱】

糞鏈球菌核酸快速檢測試劑盒

【產品簡介】

本試劑盒基于環(huán)介導的恒溫擴增技術（Loop-mediated isothermal amplification，LAMP），用于包裝飲用水等水體中糞鏈球菌的快速檢測，并借助顯色指示劑直接判讀結果。

【檢測原理】

利用兩對特殊引物和具有鏈置換活性的Bst DNA聚合酶，使模板兩端引物結合處循環(huán)出現環(huán)狀單鏈結構，引物順利與模板結合并進行鏈置換擴增反應，實現在恒溫條件下（60-65℃）進行連續(xù)快速擴增。反應加入顯色指示劑，陰陽性結果顯色差異顯著，可直接通過顏色變化判讀結果。

【產品特點】

1.快速簡便：將酶、引物等反應組分混勻后進行干粉化處理，增加試劑穩(wěn)定性，使用時減少溶液配制步驟，更為便捷，整個檢測反應可在1 h內完成；

2.特異性高：利用靶基因序列上的多個獨立區(qū)域設計多條引物，保證擴增反應的高度特異性；

3.靈敏度高：檢驗限達到9 CFU/Test；

4.判讀簡單：反應前加入顯色指示劑，反應后通過肉眼觀察反應液顏色變化或者經熒光監(jiān)測儀器跟蹤熒光圖譜的變化判讀結果，直觀方便，且可有效避免反應后開蓋造成的氣溶膠污染。

【產品組分】

組分名稱　　　　 　規(guī)格×數量

檢測試劑（凍干）   3排× 8管

復溶液　　　 　 　 650 μL × 1管

陽性對照（凍干）   1管

陰性對照（凍干）   1管

裂解液　　　 　 　 1 mL × 1管

顯色指示劑　　　　80 μL×1管

超純水　　　 　 　 1 mL×1管

說明書　　　 　 　 1份

2~8℃條件下儲存，有效期為12個月

【適用儀器】

1.PCR儀器或金屬浴恒溫器，如果檢測樣品為DNA樣品，水浴鍋即可。

2.高速離心機，樣品的前處理需要用高速離心機做分離。

【樣品富集】

1.樣品前處理：取250 mL待檢水樣進行抽濾，濾膜置于100ml疊氮化物葡萄糖液態(tài)培養(yǎng)基進行前增菌8-12 h，對增菌液中的菌體富集用于LAMP微生物快速檢測。

2.適用樣品類型：增菌液或者可疑菌落樣品。

3.待測樣品存放：粗提的待檢DNA樣品保存于-4~0℃，不應該超過24 h；利用試劑盒提取的DNA樣品可在-20℃長期保存，但應避免反復凍融。

【使用指南】

1.樣品前處理

A.樣品增菌液模板DNA的制備：

a)吸增菌液1 mL到1.5 mL規(guī)格的無菌離心管中，6000 r/min離心5 min，棄上清；

b)加入30 μL裂解液，充分懸浮菌體，輕彈管壁消除氣泡，99℃加熱10 min。

c)12000 r/min離心15 min，上清即為粗提的DNA，可轉移至0.2 mL無菌離心管中，在-20℃下可長期保存。

B. 可疑菌落模板DNA的制備：

挑取可疑菌落，懸浮到含30 μL裂解液的無菌離心管中，后按照上述步驟b)、c)操作。

2.陰、陽性對照和干粉試劑復溶

A.陰、陽性對照復溶

使用時，加入超純水至陽性對照和陰性對照凍干粉中，待溶解后混勻，-20℃存儲。

B.干粉試劑復溶

取出凍干粉試劑，按照需求剪取n個檢測試劑管（n=待檢測樣品數+1管陽性對照+1管陰性 對照），每管加入20 μL復溶液，溶解后待用。

1.擴增反應

A.打開能夠提供恒溫條件的儀器，設置到64℃待用；

B.向上述已加入復溶液的n個反應管中各加入顯色指示劑2.5 μL；

C.向上述已加入復溶液的n個反應管中分別加入待測樣品核酸、陰性對照、陽性對照各2.5 μL，蓋緊蓋子；

D.將所有的反應管置于恒溫儀器中，恒溫64℃反應50 min。

2.結果判讀

反應結束后，建議在自然光線充足的環(huán)境條件下，將樣品置于白色背景下觀察結果，陰性對照檢測試劑管呈淡橙色，陽性對照檢測試劑管呈熒光綠，待測樣品反應管以此作為對照進行判讀，若陰陽對照反應管任一結果與上述情況不符，則本次檢測結果無效，應重新檢測或與產品技術支持聯系。